因使用的波长范围不同,分光光度计可分为紫外光分光光度计、可见光分光光度计、红外光分光光度计和万用(全波段)分光光度计等。但无论哪一类分光光度计,都由光源、单色器、狭缝、比色杯和检测器系统组成。
1.光源
要求光源能提供所需波长范围的连续光谱,稳定且有足够强度。常用的光源有白炽灯(如钨灯、卤钨灯等)、气体放电灯(如氢灯、氘灯及氙灯等)、金属弧灯(如各种汞灯)等多种。钨灯和卤钨灯发射波长为320~2000nm的连续光谱,最适宜工作范围为360~1000nm,稳定性好,常用作可见光分光光度计的光源。氢灯和氘灯能发射波长为150~400nm的紫外光,可用作紫外光区分光光度计的光源。汞灯发射的不是连续光谱,能量绝大部分集中在253.6nm波长外,一般作波长校正用。
2.单色器
单色器是将来自光源的复合光分散为单色光的装置,可分成滤光片、棱镜和光栅三部分。滤光片能让某一波长的光透过,而将其他波长的光吸收。滤光片可分成吸收滤光片、截止滤光片、复合滤光片和干涉滤光片。棱镜是用玻璃或石英材料制成的一种分光装置。其原理是:光从一种介质进入另一种介质时,不同波长的光在棱镜内的传播速度不同,其折射率也就不同,从而将不同波长的光分开。玻璃棱镜色散能力大,分光性能好,能吸收紫外线而用于可见光分光光度计。石英棱镜可用于可见光分光光度计和紫外光分光光度计。光栅是分光光度计常用的一种分光装置。其特点是波长范围宽,可用于紫外、可见和近红外光区,而且分光能力强,光谱中各谱线的宽度均匀一致。
3.狭缝
狭缝是由一对隔板在光通路上形成的缝隙,用来调节入射单色光的纯度和强度,也直接影响分辨率。狭缝宽度可在0~2mm内调节。由于棱镜色散力因波长的不同而变化,因此较先进的分光光度计的狭缝宽度可随着波长一起调节。(www.xing528.com)
4.比色杯
比色杯又称为吸收池或比色皿。比色杯常用无色透明、耐腐蚀和耐酸碱的玻璃或石英材料做成,用于盛放待比色溶液。玻璃比色杯用于可见光区,而石英比色杯用于紫外光区。比色杯的光径为0.1~10cm,一般为1cm。同一台紫外可见分光光度计上的比色杯,其透光度应一致,在同一波长和相同溶液下,比色杯间的透光度误差应小于0.5%,使用时应对比色杯进行校准。
5.检测器系统
有许多金属能在光的照射下产生电流,并且光越强,电流越大,此即光电效应。因光照射而产生的电流叫做光电流。受光器有两种,一是光电池,二是光电管。光电池的种类繁多,最常见的是硒光电池。光电池受光照射产生的电流较大,可直接用微电流计量出。但是,连续照射一段时间后会产生疲劳现象,使光电流下降,要在暗中放置一段时间才能恢复。因此,使用时不宜长期照射,随用随关,以防止光电池因疲劳而产生误差。
光电管装有一个阴极和一个阳极。阴极用对光敏感的金属(多为碱土金属的氧化物)做成,当光照射到阴极且达到一定能量时,金属原子中的电子发射出来。光越强,光波的振幅越大,电子放出的就越多。电子是带负电的,被吸引到阳极上而产生电流。光电管产生的电流很小,需要放大。分光光度计中常用电子倍增光电管,在光照射下所产生的电流比其他光电管要大得多,这就提高了测定的灵敏度。
检测器产生的光电流以某种方式转变成模拟的或数字的结果。模拟输出装置包括电流表、电压表、记录器、示波器及与计算机联用等。数字输出则通过模拟/数字转换装置,如数字式电压表等。
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