基于该配合物良好的电化学活性及DNA靶向嵌插结合作用，将其作为一种指示探针用于CaMV35S特征寡聚核苷酸序列的杂交检测。为了得到最佳的检测信号，首先考察了指示剂富集时间和配合物的浓度对检测的影响。将探针修饰电极（S1/GCE）与2.0×10-9mol/L互补序列S2在42℃水浴中杂交45min后得到S2-S1/GCE，取出淋洗后放入含有Os（DPPZ）（PC）（H2O）的0.1 mol/L PBS缓冲溶液（pH=6.86）中，隔一定时间进行微分脉冲伏安扫描。实验结果表明，在开始阶段随着富集时间的延长，还原峰电流Ipc逐渐增大，当富集15 min后，峰电流达到最大值且趋于平衡，表明配合物Os（DPPZ）（PC）（H2O）在电极表面的富集达到饱和，因此在杂交实验中选择15 min为富集时间。将杂交后的电极放入不同浓度的配合物溶液中进行饱和富集，取出淋洗后放入0.1 mol/L的PBS缓冲溶液（pH=6.86）中进行微分脉冲伏安扫描，考察Os（DPPZ）（PC）（H2O）浓度对峰电流Ipc的影响。结果表明，当配合物的浓度达到1.2×10-3mol/L时，Ipc达到最大值，因此选择1.2×10-3mol/L为配合物的最佳浓度。
在最佳反应条件下，考察了以Os（DPPZ）（PC）（H2O）作为杂交指示剂的传感器对目标DNA的定量分析能力（图5.1.4）。由图5.1.4可见，当S1/GCE未与互补序列杂交时，在空白液中未得到任何指示剂的电化学信号（图5.1.4谱线a），表明该配合物在S1/GCE上不产生富集作用。而文献报道的嵌插指示剂［Ru（bpy）2DPPZ］2+［28］和［Os（DA-bpy）2DPPZ］2+（DA-bpy=4，4'-二氨基-2，2'-二吡啶）[7]等虽然与双螺旋DNA产生强嵌插作用，但由于其与单链DNA探针之间存在静电作用，导致出现一定的背景信号。本书通过电荷控制合成电中性配合物，可避免其作为指示剂与探针DNA之间的非特异性静电作用，使传感器的背景信号响应降至最低。另外，随着S1/GCE与不同浓度互补序列杂交反应的进行，在杂交电极上获得的峰电流越来越大，表明修饰电极表面杂交后的双螺旋DNA的量越来越多。将峰电流Ipc与靶序列浓度c（S2）作图，发现当c（S2）在8.0×10-10～2.8×10-9mol/L范围内变化时，Ipc与c（S2）呈良好的线性关系，Ipc=1.20×10-2c（S2）+6.01×107，R2=0.9931，检出限为2.0×10-10mol/L（S/N=3），比文献值[29，30]明显降低，表明应用Os（DPPZ）（PC）（H2O）作为电化学杂交指示剂能在较低的浓度范围内完成对寡聚核苷酸片段的定量检测。
图5.1.4 Os（DPPZ）（PC）（H2O）作为杂交指示剂的传感器与不同浓度S2相互作用的微分脉冲伏安图。插图：氧化峰电流（Ipa）与S2浓度（cS2）的线性曲线关系。(www.xing528.com)
将S1/GCE分别与互补序列S2、单碱基错配序列S3、三碱基错配序列S4和非互补序列S5杂交，进一步考察了Os（DPPZ）（PC）（H2O）作为杂交指示剂的选择性。由图5.1.5可见，在S1/GCE上未得到任何指示剂的电化学信号（图5.1.5谱线a）；而与S1/GCE相比，在杂交后的S2-S1/GCE上得到1个明显的还原峰（图5.1.5谱线b），表明杂交反应完成；而与非互补序列S5杂交后，在S5-S1/GCE上得到的电化学响应与S1/GCE非常相似，也未观察到明显的法拉第电流（图5.1.5谱线e），表明探针序列S1未与非互补序列S5发生有效的杂交反应；当S1/GCE分别与单碱基错配序列S3和三碱基错配序列S4杂交后，在S3-S1/GCE和S4-S1/GCE上得到的电化学响应（图5.1.5谱线c和d）均比S2-S1/GCE修饰电极小，且电化学信号随着错配碱基数目的增多而降低，说明单碱基错配序列S3和三碱基错配序S4能与探针序列S1发生部分杂交，且错配碱基数目越多对DNA双螺旋结构的影响越大。以上结果表明，将Os（DPPZ）（PC）（H2O）作为电化学活性探针能有效地识别DNA在电极表面的杂交过程，对电化学检测互补、非互补和碱基错配序列具有良好的识别能力。
图5.1.5 S1/GCE（a）与2.0×10-9 mol/L互补序列S2 （b），单碱基错配序列S3 （c），三碱基错配序列S4（d）和非互补序列S5（e）杂交后在[Os(DPPZ)(PC)(H2O)]中富集饱和后在0.1 mol/L pH 6.86 PBS中检测的微分脉冲伏安曲线
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