测定单宁含量的容量法及其原理

（一）分光光度法

1.测定原理

依据单宁不溶于苯、可溶于乙醇的特性，试样先用苯抽提除去有机溶剂抽出物后，用乙醇处理将单宁溶解，采用分光光度计测定溶出液在波长500nm处的光密度（表示溶液的浓度），由标准曲线即可得到单宁的含量。

2.仪器

a.分光光度计；b.索氏抽出器；c.实验室常用仪器。

3.试剂

① 钨酸钠-磷钼酸试剂：取100g钨酸钠、20g磷钼酸及50mL 85%磷酸溶于750mL水中，于水浴上加热溶解（大约2h），冷后加水稀释至1000mL。

② 1mol/L Na₂CO₃溶液：称取106g无水碳酸钠，于1000mL水中，在70～80℃加热至溶解，放置过夜，用玻璃棉过滤后使用。

③ 标准单宁酸溶液：称取0.1g单宁酸，溶于1000mL水中。此溶液1mL含单宁酸0.1mg。使用前新配。

④ 苯。

⑤ 乙醇。

4.标准曲线的绘制

精确量取不同量标准单宁酸溶液于50mL容量瓶中（瓶中预先放好25mL水），加入2mL乙醇、5mL 1mol/L Na₂CO₃溶液及2.5mL钨酸钠-磷钼酸试剂，再加水冲稀至刻度，摇匀后在25℃水浴中放置30min。将此有色溶液倒入比色皿中，用分光光度计，以波长500nm（或红色滤光片）分别测定其光密度。以单宁含量（mg）为横坐标，光密度为纵坐标，绘制成标准曲线。

5.测定步骤

精确称取1g（称准至0.0001g）已磨细的试样（同时另称试样测定水分），用滤纸包好，用苯在索氏抽提器中抽提8h。而后将试样风干，将风干后的试样放入100mL具磨口玻塞的锥形瓶中，加入20mL乙醇，于沸水浴中加热回流1h。过滤于50mL干容量瓶中，用平头玻璃棒用力挤压瓶中的残渣，将挤出的抽提液也滤入同一容量瓶中，然后向锥形瓶中再加入20毫升乙醇，继续在沸水浴中抽提1h，再滤入同一容量瓶中，并用乙醇分次洗涤残渣，直至容量瓶刻度，摇匀，即为样品溶液。

用移液管吸取2mL样品溶液于50mL容量瓶中（瓶中预先放好25mL水），按上述绘制标准曲线的操作，进行分光光度法测定，记录其样品溶液的光密度，再根据标准曲线，求得样品中相当的单宁含量。

6.结果计算

原料中单宁含量w_单宁（%）按式（2-30）计算：

式中 m₁——根据标准曲线求得相当样品中的单宁含量，mg

m——风干试样质量，g

w——试样水分，%

2/50——试样处置后置于50mL容量瓶中，取2mL进行测试

分光光度法的再现性较好，准确度符合要求，但必须严格按规定条件进行。(www.xing528.com)

（二）容量法

1.测定原理

依据单宁不溶于苯、可溶于乙醇和能为动物胶所沉淀的特性进行测定。试样经苯抽提和用乙醇溶出后，将溶解液用高锰酸钾标准溶液滴定（以靛红溶液为指示剂），测定出全部可被氧化物质的总量。然后，用动物胶、氯化钠溶液使单宁沉淀，再用高锰酸钾溶液滴定出除单宁以外的被氧化物质的量，根据其差值即可计算出单宁的含量。

2.仪器

① 索氏抽提器；

② 实验室常用仪器。

3.试剂

a.0.1mol/L H₂C₂O₄溶液：每1000mL含草酸6.3g；b.0.05mol/L KMnO₄标准溶液：溶解高锰酸钾1.33g于水中，稀释至1000mL，以0.1mol/L H₂C₂O₄标准溶液标定之，求得每毫升相当于草酸溶液的体积（mL）。标定方法为：吸取0.1mol/L H₂C₂O₄标准溶液25mL，加硫酸（1∶1）10mL，加热至80℃，用高锰酸钾溶液滴定；c.靛红溶液：每1000mL含靛红（不含靛蓝者）6g和浓硫酸50mL；d.动物胶溶液：浸动物胶25g于氯化钠饱和溶液中1h，加热至溶解，稀释至1000mL；e.氯化钠-硫酸溶液：以氯化钠饱和溶液975mL与浓硫酸25mL混合；f.高岭土粉末（或活性炭）；g.苯；h.乙醇。

4.测定步骤

精确称取1g（称准至0.0001g）已磨细的试样（同时另称取试样测定水分），用滤纸包好，用苯在索氏抽提器中抽提8h。而后将试样风干，放入100mL具磨口玻塞的锥形瓶中，加20mL乙醇，于沸水浴中加热1h。过滤于150mL烧杯中，用平头玻璃棒用力挤压瓶中残渣，将挤出的抽出液，也滤入烧杯中。然后再加20mL乙醇，继续在沸水浴中抽提1h。再滤入原盛抽提滤液之烧杯中，然后用乙醇分次洗涤残渣3～4次，将此抽提溶液在水浴上蒸干后，加80mL水，煮沸半小时，冷后移入100mL的容量瓶中，加水稀释至刻度（若溶液混浊，需过滤）。

用移液管吸取上层清液10mL于1000mL烧杯中，用移液管加靛红溶液25mL。再加水750mL，以0.05mol/L KMnO₄标准溶液滴定。进行时每次加少量，同时要不停搅动至得到淡绿色时，小心继续滴定至淡黄色，或边上有淡红色，此时所用0.05mol/L KMnO₄标准溶液的体积（mL）为V₁。

再用移液管吸取上述制备的试样溶液100mL与动物胶溶液50mL、氯化钠-硫酸溶液100mL、高岭土（或活性炭）10g混合，置于具磨口玻塞的锥形瓶中摇数分钟，静置澄清后，滤出清液。用移液管吸取滤液25mL（相当于原试样溶液10mL）与靛红溶液25mL及水约750mL，盛于1000mL烧杯中，用0.05mol/L KMnO₄标准溶液如上法滴定。此时所耗用的0.05mol/L KMnO₄标准溶液体积（mL）以V₂表示。

5.结果计算

原料中单宁的含量w_单宁（%）按式（2-31）计算：

式中 V₁——氧化所有可被氧化的物质所耗用的KMnO₄标准溶液量，mL

V₂——氧化单宁以外的物质所耗用的KMnO₄标准溶液量，mL

V_F——每毫升0.05mol/L KMnO₄标准溶液相当于0.1mol/L H₂C₂O₄溶液的量，mL/mL

m——风干样品质量，g

w——试样水分，%

0.004157——每毫升0.1mol/L H₂C₂O₄标准溶液相当的单宁质量，g/mL

10/100——试样处理后置于100mL容量瓶中，取10mL进行测试