建立糖尿病动物模型并辅助降血糖的实验结果

1.实验动物的选择

选用健康成年动物，常用小鼠（20 g±2 g）或大鼠（180 g±20 g），小鼠每组10～15只，大鼠每组8～12只，单一性别。

2.试验方法

（1）降低空腹血糖的试验。

建立糖尿病动物模型。常用四氧嘧啶或链脲霉素建立高血糖动物模型。这2种物质是特异性的胰岛B细胞毒剂，通过产生·而选择性地破坏胰岛B细胞，从而减少胰岛素分泌，引起实验性糖尿病。

将动物禁食24 h后给予适当剂量的造模试剂（小鼠按体重给新鲜配制的四氧嘧啶35～50 mg/kg或链脲霉素100～160 mg/kg，大鼠按体重给四氧嘧啶50～80 mg/kg或链脲霉素200～250 mg/kg），5～7 d后禁食3～5 h，取血测血糖水平，如血糖值达到了10～25 mmol/L，则糖尿病动物模型建立成功。

给受试样品。选糖尿病模型动物按禁食3～5 h的血糖水平分组，随机选1个模型对照组与3个剂量组（血糖组间差不大于1.1 mmol/L）。剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予溶剂，连续30 d，必要时可延长到45 d。测空腹血糖值（禁食同试验前），比较各组动物血糖值和血糖下降百分率。

血糖下降百分率=（试验前血糖值 – 试验后血糖值）/ 试验前血糖值×100%。

高剂量受试样品对正常动物空腹血糖的影响。选健康成年动物禁食3～5 h，测血糖，按血糖水平随机分为1个对照组和1个高剂量组。喂饲到规定天数后，禁食24 h，测空腹血糖值，比较各组动物血糖值和血糖下降百分率。

（2）糖耐量试验。将糖尿病模型动物禁食3～5 h，剂量组给不同浓度的受试样品，对照组给同体积的溶剂。15～20 min后按体重经口给予葡萄糖2.0 g/kg或医用淀粉3～5 g/kg，测定给予葡萄糖后0 h、0.5 h、2 h的血糖值或给予医用淀粉0 h、1 h、2 h的血糖值。观察对照组和受试样品组给予葡萄糖或者医用淀粉后各时间点血糖曲线下面积的变化。

血糖曲线下面积=0 h血糖值×0.25+0.5 h血糖值+2 h血糖值×0.75。(www.xing528.com)

3.结果判定

试验数据用统计软件进行处理，试验前后的血糖值比较采用配对t检验，其他数据各组间比较采用两样本均数t检验。

（1）降空腹血糖的试验：在模型成立的前提下，受试样品剂量组与对照组比较，空腹血糖实测值降低或血糖下降百分率有统计学意义，可判定该受试样品降空腹血糖的试验结果为阳性。

（2）糖耐量试验：在模型成立的前提下，受试样品剂量组与对照组比较，在给葡萄糖或医用淀粉后0 h、0.5 h、2 h血糖曲线下面积减少有统计学意义，可判定该受试样品糖耐量试验结果为阳性。

空腹血糖和糖耐量2项指标中有1项指标呈阳性，且高剂量受试样品对正常动物的空腹血糖无影响，即可判定该受试样品辅助降血糖动物试验的结果呈阳性。

4.注意事项

（1）为了使实验动物糖代谢功能状态尽量保持一致，也为了准确地按体重计算受试样品的用量，试验前动物应严格按规定禁食（不禁水），试验前后禁食条件应一致，鼠类在禁食的同时应更换衬垫物品。

（2）如用血清样品进行测定，应于取血后30 min内分离血清，分离后血清的含糖量在6 h内不变。用血清制备的无蛋白血滤液可保存48 h以上。

（3）高浓度的还原性物质（如维生素C）亦能与胆色素原竞争游离氧，干扰反应。血红蛋白能使H2O2过早分解，亦干扰反应，致使测得的血糖值偏低。故已溶血的全血或血清必须制备无蛋白滤液后，再进行测定。