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材料与试剂优化

时间:2023-06-17 理论教育 版权反馈
【摘要】:丙烯酰胺,甲叉双丙烯酰胺,去离子甲酰胺,三羟甲基氨基甲烷,乙二胺四乙酸二钠,尿素,过硫酸铵,四甲基乙二胺,氯化钠:上海国药集团化学试剂有限公司;10×PCRBuffer,dNTP,rTaqDNA聚合酶,pMD19-T载体试剂盒:宝生物工程(大连)有限公司;引物序列:由天一辉远公司合成;大肠杆菌top10:实验室保存;胰蛋白胨,酵母粉:英国OXOID公司;D5625-02土壤DNA提取试剂盒:美国Omega公司。表5-1所用引物与序列注:画线部分为GC夹子。

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丙烯酰胺,甲叉双丙烯酰胺,去离子甲酰胺,三羟甲基氨基甲烷(Tris),乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na),尿素,过硫酸铵,四甲基乙二胺(TEMED),氯化钠(NaCl)(均为分析纯,用于DGGE胶的配制):上海国药集团化学试剂有限公司;10×PCR Buffer(含镁离子),dNTP(2.5 mol/L),rTaq DNA聚合酶(5 U/μL),pMD19-T载体试剂盒(用于PCR扩增):宝生物工程(大连)有限公司;引物序列(表5-1)(用于PCR扩增):由天一辉远公司合成;大肠杆菌(Escherichia coli)top10(用于TA克隆):实验室保存;胰蛋白胨,酵母粉(用于TA克隆):英国OXOID公司;D5625-02土壤DNA提取试剂盒(用于窖泥总DNA提取):美国Omega公司。

表5-1  所用引物与序列 

(www.xing528.com)

注:画线部分为GC夹子。 

窖泥样品:采集于湖北省襄阳市古襄阳酒业有限公司,将样品保存在无菌塑料容器内,迅速放置到-70 °C冰箱,备用,新窖下层窖泥样品记为XS,新窖中层的窖泥样品记为XZ,新窖上层的窖泥样品记为XX,老窖下层窖泥样品记为LX,分别选取5个窖池,每个新窖窖池采集了3个样品,老窖采集了1个样品。

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