作为我国销量最大的白酒类型,浓香型白酒是以粮谷为主要原料,经传统固态法发酵、蒸馏、陈酿和勾兑而成[1]。浓香型白酒的发酵主要在窖池中完成,窖泥微生物区系的形成和演变决定了产品的最终质量[2],因而对窖泥中微生物的群落结构进行解析则显得尤为重要。目前国内学者常采用传统微生物学手段[3-5]和指纹图谱技术[6-8]揭示窖泥中微生物的多样性。然而传统微生物学手段依赖于纯培养技术,对于多数营养要求苛刻、严格厌氧的微生物分离较为困难,难以获取微生物群落更为完整全面的信息[9]。虽然指纹图谱技术具有不需要培养的技术优势,但仍存在无法实现样品间平行分析和图谱条带信息量低的缺陷[10]。
以Illumina MiSeq为代表的第二代高通量测序技术具有通量高、准确率高和试验周期短的特点,可在分类学地位“属”水平上全面客观地揭示目标环境中微生物群落信息[11]。Liu M分别采用变性梯度凝胶电泳技术(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)和MiSeq技术对泸州老窖5年与100年窖泥中的真菌微生物进行了研究,结果发现DGGE仅检测到了12个菌属,而Miseq技术可以检测到111个菌属[12]。通过对泸州老窖30和300年窖龄窖泥细菌微生物多样性研究,Zheng Q发现虽然不同年份窖泥均以Lactobacillus(乳酸杆菌)为主,但30年窖龄窖泥中乳酸菌的相对含量达到90%以上,而在300年窖龄窖泥中其相对含量仅为21%~40%[13]。湖北省是国内白酒生产与消费的重要省份,2016年白酒产量逾90万千升,销售收入近800亿元,白酒生产企业近450家[14]。作为省域副中心城市的襄阳市亦提出了力争襄阳白酒产业过百亿元,打造鄂酒除稻花香和白云边之外的湖北白酒“第三极”的行业发展目标。然而令人遗憾的是,目前关于襄阳地区浓香型白酒窖泥微生物多样性评价的报道尚少。(www.xing528.com)
本研究采用Miseq高通量测序技术,对4份采集自湖北古襄阳酒业窖泥的细菌多样性进行了解析,同时结合传统微生物学手段和分子生物学方法对其中蕴含的乳酸菌菌株进行了分离鉴定,通过本项目的实施以期为华中地区浓香型白酒窖泥微生物的多样性研究提供参考。
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