科研人员针对二代测序技术的不足，开发出第三代测序技术，包括Helicos Biosciences公司的单分子DNA测序（True single molecular sequencing，tSMS）、Pacific Bioscience（PacBio）公司的单分子实时测序（Single molecule real time sequencing，SMRT）以及Oxford Nanopore 的纳米孔单分子技术[54-55]。以PacBio SMRT测序技术为例，PacBio公司的SMRT技术基于边合成边测序的思想，核心是零模式波导技术（Zero-mode waveguide technology，ZMW），以SMRT芯片为载体进行测序反应。ZMWs直径为100 nm、厚度为70 nm，刚好容纳一个DNA聚合酶分子，从而观察到DNA链合成过程。测序过程中，DNA聚合酶附着在ZMW孔底部，携带荧光标记的碱基，以单分子DNA为模板。在读取模板过程中，DNA聚合酶能结合不同碱基会发出不同颜色的信号，从而判别碱基种类[56-57]。
Mosher等[56]在2014年，使用PacBio SMRT测序技术对环境样品微生物多样性进行研究，认为SMRT技术比Roche/454测序技术精度要高。对16S rDNA基因V4区的测序表明，SMRT技术的错误率为Roche 454与MiSeq等二代测序平台的1/8[57]。使用SMRT技术对铁皮石斛和丹参基因组的研究，充分说明了SMRT技术的优越性，读长更长，且能免受DNA中高GC含量的影响，在对复杂基因组完整组装分析时，体现出了巨大的优越性[58]。此外，SMRT技术能识别DNA的甲基化，应用大对生物DNA甲基化研究中。在对传统发酵食品如米酒曲[59]、泡菜[60]、乳制品与肠道微生物[61]的研究中也引入了SMRT三代测序技术，但尚未见到三代测序技术在白酒窖泥微生物研究中的任何报道。(www.xing528.com)
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
