食品中漂白剂的检测方法

《食品中亚硫酸盐的测定》（GB/T 5009.34—2003）规定了蒸馏法测定食品中二氧化硫含量、盐酸副玫瑰苯胺法测定亚硫酸盐的含量。《食品中残留过氧化氢的测定方法》（GB/T 23499—2009）规定了钛盐比色法测定食品中残留过氧化氢的含量。

（一）蒸馏法测定二氧化硫

1.原理

在密闭容器中对样品进行酸化并加热蒸馏，蒸出二氧化硫，然后用乙酸铅溶液吸收，用浓盐酸酸化，再用碘标准溶液滴定，根据所消耗的碘标准溶液量计算试样中二氧化硫的含量。

2.适用范围

本标准适用于色酒、葡萄糖糖浆、果脯中二氧化硫含量的测定。

3.试剂

（1）盐酸（1+1）。

（2）20g/L乙酸铅溶液：称取2g乙酸铅，溶于少量水中并稀释至100mL。

（3）碘标准溶液：将0.1mol/L碘标准溶液稀释10倍。

（4）淀粉指示液：称取1g可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入100mL沸水中，随加随搅拌，煮沸，放冷，备用（临用时配制）。

4.仪器

（1）全玻璃蒸馏器。

（2）碘量瓶。

（3）酸式滴定管。

5.操作方法

（1）样品处理固体样品用刀切或剪刀剪成碎末后混匀，称取约5.00g均匀样品。液体样品可直接吸取5.0～10.0mL样品。

（2）测定。

①蒸馏：将称好的样品置入圆底烧瓶中，加入250mL水，装上冷凝装置，冷凝管下端应插入碘量瓶中的25mL乙酸铅（20g/L）吸收液中，然后在蒸馏瓶中加入10L盐酸（1+1），立即盖塞加热蒸馏。当蒸馏液约为200L时，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min，用少量蒸馏水冲洗插入乙酸铅溶液中的装置部分。在检测样品的同时要做试剂空白试验。

②滴定：在取下的碘量瓶中依次加入10mL浓盐酸、1mL淀粉指示液，摇匀之后用0.01mol/L碘标准溶液滴定至变为蓝色且在30s内不褪色为止。

6.结果计算

样品中二氧化硫的含量按下式进行计算。

式中：X——样品中二氧化硫的总含量，g/kg；

V1——滴定样品所用碘标准溶液的体积，mL；

V2——滴定试剂空白所用碘标准溶液的体积，mL；

m——样品的质量，g；

0.01——碘标准溶液的浓度，mol/L；

0.032——与1L碘标准溶液相当的二氧化硫的质量，g/mmol。

（二）盐酸副玫瑰苯胺法测定亚硫酸盐

1.原理

亚硫酸盐或二氧化硫，与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺发生反应，生成紫红色物质，其色泽深浅与亚硫酸的含量成正比，可比色测定。

2.试剂

（1）四氯汞钠吸收液：称取27.2g氯化汞及11.9g氯化钠，溶于水并定容至1000mL，放置过夜，过滤后备用。

（2）12g/L氨基磺酸胺溶液。

（3）2g/L甲醛溶液：吸取0.55mL无聚合沉淀的36%甲醛，加水定容至100mL，混匀。

（4）淀粉指示剂：称取1g可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入100mL沸水中，随加随搅拌，煮沸，放冷，备用（临用时配制）。

（5）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并定容至100mL。

（6）乙酸锌溶液：称取22g乙酸锌溶于少量水中，加入3mL冰醋酸，用水定容至100mL。

（7）盐酸副玫瑰苯胺溶液：称取0.1g盐酸副玫瑰苯胺于研钵中，加少量水研磨，使溶解，定容至100mL。取出20mL置于100mL容量瓶中，加6mol/L盐酸，充分摇匀后，使溶液红变黄，如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄色，用水定容至100mL，混匀备用（若无盐酸玫瑰苯胺，可用碱性品红代替）。

盐酸副玫瑰苯胺的精制方法：称取20g盐酸副玫瑰苯胺于400mL水中，用50mL 2mol/L液酸酸化，徐徐搅拌，加4～5g活性炭，加热煮沸2min。将混合物倒入保温漏斗趁热过滤。滤中，放置过夜，出现结晶，用布氏漏斗抽滤，将结晶再悬浮于1000mL乙醚-乙醇（10∶1）的混合液中，振摇3～5min，以布氏漏斗抽滤，再用乙醚反复洗涤至带层不带色为止，于硫酸干燥器中干燥，研细后贮存于棕色瓶中。

（8）0.1mol/L碘溶液。

（9）0.1000mol/L硫代硫酸钠标准溶液。

（10）二氧化硫标准溶液：称取0.5g亚硫酸氢钠，溶于200mL四氯汞钠吸收液中，放置过夜，上清液用定量滤纸过滤备用。

标定：吸取10mL亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液于250mL碘量瓶中，加100mL水，准确加入0.1mol/L碘溶液20mL、冰醋酸5mL，摇匀，置暗处2min后迅速以0.1000mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加0.5mL淀粉，指示剂呈蓝色，继续滴定至无色。

另取100mL碘量瓶，准确加入20.0mL 0.05mol/L碘溶液、5mL冰醋酸，按同一方法做试剂空白试验。

结果计算：

式中：X——二氧化硫标准溶液的浓度，mg/mL；

V1——滴定亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；

V2——滴定空白消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；

c——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L；

32.03——每毫升硫代硫酸钠标准溶液相当于二氧化硫的质量，mg。

（11）二氧化硫标准使用液：取二氧化硫标准液，用四氯汞钠吸收液稀释成2mg/mL二氧化硫溶液。临用时配制。

（12）0.5mol/L氢氧化钠溶液。

（13）0.25mol/L硫酸溶液。

3.仪器

分光光度计。(www.xing528.com)

4.操作方法

（1）样品处理。

①水溶性固体试样（如白砂糖）：称取10g样品，以少量水溶解，置于100mL容量瓶中，加入0.5mol/L氢氧化钠溶液4mL，5min后加入0.25mol/L硫酸溶液4mL，加入20mL四氯汞钠吸收液，用水稀释至刻度。

②其他固体样品（如饼干）：称取5～10g样品，研磨均匀，以少量水湿润.并移入100mL容量瓶中，加入20mL四氯汞钠吸收液，浸泡4h以上。若上层溶液不澄清，可加入亚铁氰化钾及乙酸锌溶液各2.5mL，最后用水稀释至刻度。

③液体试样（如葡萄酒）：吸取5～10mL样品于100mL容量瓶中，以少量水稀释，加入20mL四氯汞钠吸收液，用水稀释至刻度，混匀，备用。

（2）测定。

①吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL及2.00mL二氧化硫标准使用液（相当于0.0mg、0.4mg、0.8mg、1.2mg、1.6mg、2.0mg、3.0mg及4.0mg二氧化硫），分别置于25mL比色管中。各加入四氯汞钠吸收液至10mL，然后再各加入1mL 1.2%氨基磺酸胺溶液、1mL 0.2%甲醛溶液及1mL盐酸副玫瑰苯胺溶液。摇匀，放置20min。用1cm比色皿，以不加二氧化硫标准液的比色管溶液作为参比，于550nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

②试样测定：吸取0.5～5.0mL样品处理液（视含量高低而定）于25mL比色管中，按标准曲线绘制实验操作进行，于550nm处测定吸光度，由标准曲线查出试液中二氧化硫的含量。

5.结果计算

样品中二氧化硫的含量按下式进行计算。

式中：X——样品中二氧化硫的总含量，g/kg；

V——测定用样液的体积，mL；

A——测定用样液中二氧化硫的质量，μg；

m——样品的质量，g。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

6.说明

（1）颜色较深样品，需用活性炭脱色。

（2）样品中加入四氯汞钠吸收液以后，溶液中的二氧化硫含量在24h内稳定，测定需在24h内进行。（四氯汞钠作为萃取剂，如果用水萃取，易造成二氧化硫的丢失，20℃时，1体积水溶解40体积二氧化硫。）

（3）四氯汞钠毒性甚大，有人研究用EDTA代替。

（4）最适宜反应温度为20℃～25℃，温度低，灵敏度低，故标准管与样品管需在相同温度下显色。若温度为15℃～16℃，放置时间需延长为25min。

（5）盐酸副玫瑰苯胺中的盐酸用量对显色有影响，加入盐酸量多，显色浅；量少，显色深，所以要按规定进行。

（6）甲醛浓度在0.15%～0.25%时，颜色稳定，故选择0.2%甲醛溶液。

（7）盐酸副玫瑰苯胺加入盐酸调成黄色，放置过夜后使用，以空白管不显色为宜，否则应重新调节。

（三）钛盐比色法测定过氧化氢

1.原理

过氧化氢在酸性溶液中，与钛离子生成稳定的橙色过氧化物——钛络合物，在430nm波长下，吸光度与样品中过氧化氢的含量成正比，可用比色法测定样品中过氧化氢的含量。

2.试剂

（1）0.100mol/L高锰酸钾标准溶液。

（2）20μg/mL过氧化氢标准使用液。

（3）1mol/L盐酸：量取90mL盐酸，加入1000mL水中。

（4）硫酸（1+4）：量取10mL硫酸，加入40mL水中。

（5）钛溶液：称取1.00g二氧化钛、4.00g硫酸铵于250mL锥形瓶中，加入100mL浓硫酸，上面放置一个小漏斗，置于可控温电热套中150℃保温15～16h，冷却后以400mL水稀释，最后用滤纸过滤，清液备用。

3.仪器

（1）天平：感量为0.01g。

（2）高速捣碎机。

（3）分光光度计。

4.操作方法

（1）样品处理。

①固体样品：称取10g样品，以少量水溶解，置于100mL容量瓶中。对蛋白质、脂肪含量较高的样品，可加入乙酸锌溶液5mL、亚铁氰化钾溶液5mL，用水稀释至刻度，摇匀。浸泡30min，用滤纸过滤，滤液作为试样液备用。

②液体试样：吸取25g样品于100mL容量瓶中。对蛋白质、脂肪含量较高的样品，可加入乙酸锌溶液5mL、亚铁氰化钾溶液5mL，用水稀释至刻度，摇匀。用滤纸过滤，滤液作为试样液备用。

③若样品有颜色，加入1g活性炭，振摇1min，用滤纸过滤，滤液作为试样液备用。

（2）测定。

①吸取0.00mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、7.50mL及10.00mL过氧化氢标准使用液（相当于0μg、5μg、10μg、20μg、500μg、100μg、150μg及200μg过氧化氢），分别置于25mL比色管中。各加入钛溶液5.0mL，用水定容至25mL摇匀，放置10min。用5cm比色皿，以空白管调节终点，于430nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

②试样测定：吸取10.00mL样品处理液于25mL比色管中，按标准曲线绘制实验操作进行，于430nm处测定吸光度，同时做试剂空白试验。

如果经活性炭处理后仍有颜色干扰，应扣除试样液的本底色，即用5.0mL稀硫酸代替钛溶液，其他按上述方法操作。

5.结果计算

样品中过氧化氢的含量按下式进行计算。

式中：X——样品中过氧化氢的含量，mg/kg；

c——试样测定液中过氧化氢的质量，μg；

V1——试样处理液的体积，mL；

V2——测定用样液的体积，mL；

B——样品稀释倍数；

m——样品的质量，g。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。