抗氧化活性检测方法

除厌氧生物以外，所有的动植物都需要氧。氧不仅会影响细胞的分化和个体的发育，而且能促进生命的进化。同时，人体在氧的利用过程中，会因各种内因性或外因性原因，而产生各种活性氧和自由基（free radical），它们与机体的衰老和某些疾病的病理过程密切相关。

自由基是指能独立存在的、含有一个或一个以上不配对电子的任何原子或原子团。活性氧是指氧的某些代谢产物和一些反应的含氧产物，其化学性质比氧（基态氧）更为活泼，包括氧自由基和非自由基的含氧物。机体自由基的种类有很多，主要包括氧自由基（超氧阴离子、羟自由基、氢过氧基、烷氧基、烷过氧基）、非氧自由基（氢自由基、有机自由基）和氮自由基（氧化氮、二氧化氮）等。同时，机体内也有一个完整的抗氧化防御体系，通过体内各种抗氧化酶（如超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GPx、过氧化氢酶CAT等）和非酶抗氧化剂（如抗坏血酸、维生素E、辅酶Q等），分别在预防、阻断和修复等不同水平上进行防御。正常情况下，机体内的自由基总是处于不断产生和消除的动态平衡中。但是，当自由基产生过多或清除过少时，便会造成对组织的伤害。人身体中各组织器官损伤、病变的其中一个重要原因就是各种氧自由基所引发的氧化作用。现已证实，氧化作用与动脉硬化、心脏病、肿瘤、肾病、肝病、糖尿病、白内障以及衰老等百余种疾病的发生和发展密切相关。因此，抗氧化活性成分的开发与应用成为食品、医药领域的一个研究热点。

对生物活性成分的抗氧化能力测定方法有很多，包括直接的、间接的以及简便的试剂盒检测方法等。这些方法的测定原理各不相同，都有各自的优缺点和局限性。因此，为得到确切、满意的评价结果，需要用多种方法进行测定。

1.自由基清除能力的测足

通过直接测定抗氧化剂对反应体系所产生自由基的清除情况，了解其抗氧化的能力。对于发色性自由基（如DPPH、ABTS/正肌铁红蛋白/H2O2、ABTS/ABAP、ABTS/过氧化物酶），可以直接通过分光光度法来测定。由于一些自由基可通过氧化反应使反应体系产生颜色变化，故通过测定抗氧化剂对反应体系吸光度的影响，就能知道自由基被清除的情况，如脱氧核糖.铁体系法测定羟自由基清除率实验。某些荧光试剂会被自由基氧化而消光，可通过测定其荧光的变化来了解自由基的清除率，如荧光素/AAPH法、荧光素/辅酶（Ⅱ）法、β-藻红蛋A法等都是利用这个原理。

2.脂质过氧化反应的测定

氧自由基可以攻击生物膜磷脂中的多不饱和脂肪酸而引发脂质过氧化，从而导致细胞损伤。同时在氧的参与下，脂质过氧化反应所产生的脂氢过氧化物易分解生成一系列复杂产物，其中某些分解产物还能引起细胞代谢和功能障碍。通过分析抗氧化剂影响脂质过氧化反应的情况，便能了解其抗氧化活性的大小。采用氧电极测定氧的消耗量或通过检测脂质过氧化反应产物（如醛、脂氢过氧化物、共轭二烯等）量的变化，都可以分析脂质过氧化反应的情况。(www.xing528.com)

3.细胞氧化损伤的检测

自由基可以攻击细胞组织中的脂质、蛋A质、糖类和DNA等物质，引起脂质和糖类的氧化、蛋白质的变性、酶的失活、DNA结构的切断或碱基变化等，从而导致细胞膜、遗传因子等的损伤。以ABAP、AMVN等自由基引发剂引发细胞氧化损伤，分析抗氧化剂对细胞的保护作用，了解其抗氧化能力。具体包括：通过MTT比色法检测细胞活力，通过二苯胺法、荧光分光光度法或Comet法分析DNA损伤断裂的情况，通过差示扫描量热法、X射线衍射、电子自旋共振（ESR）、核磁共振及荧光偏振等方法从不同角度分析细胞膜流动性等。

4.其他体外检测方法

铁过载能够增加活性氧的毒性，加速自由基反应，造成细胞氧化应激损伤。测定抗氧化剂螯合铁离子的能力，可从另一个方面反映其抗氧化活性。此外，还可测定抗氧化剂的还原能力，如FRAP法检测还原Fe3+能力等。

5.食品抗氧化功能的检测

根据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003）的规定，检验保健食品抗氧化功能需要进行动物实验和人体试食实验，检测项目包括过氧化脂质（丙二醛或脂褐质）含量和抗氧化酶（SOD、GPx）活性。过氧化脂质含量减少、抗氧化酶活性提高都能说明其具有抗氧化功能。