香豆素类化合物含量分析

香豆素类（coumarins）成分是一类具有苯并α-吡喃酮母核的天然成分的总称，常以游离状态或与糖结合成苷的形式存在。由于其苯并α-吡喃酮共轭结构的存在，香豆素类化合物在紫外光区有较强的特征吸收，结构中的酚羟基、内酯键等有特殊的显色反应。

1.荧光分光光度法

香豆素类化合物在紫外光的照射下显蓝色荧光，且因其环上所带取代基的不同及取代位置的不同，荧光的颜色也明显不同，因此可用荧光分光光度法进行定量分析。其优点在于灵敏度高，选择性高，方便快捷，重现性好，取样容易，样品需要量少。当样品中干扰成分过多时，可先利用薄层色谱进行分离。

2.紫外-可见光分光光度法

香豆素类成分都具有紫外吸收，当样品较纯净时，可直接进行比色测定。也可通过显色反应显色后，在可见光区域进行比色。如异羟肟酸铁、4-氨基安替比林或氨基比林、三氯化铁、三氯化铁-铁氰化钾、磷钼酸、磷钨酸等，都可与香豆素类成分发生显色反应。当干扰成分较多时，可先用薄层色谱分离，在紫外灯下定位找出相关香豆素类成分，将其斑点完全刮下，用溶剂洗脱后加入显色剂显色、比色测定。

3.薄层扫描法(www.xing528.com)

薄层扫描法是香豆素类成分常用的测定方法之一，其优点是方法简便、准确。可将样品经薄层色谱分离后，喷洒显色剂显色后扫描。也可利用香豆素的荧光特性，在紫外灯下定位后直接扫描。

4.高效液相色谱法

HPLC测定香豆素类成分，常用C18固定相，流动相为不同比例的甲醇-水。对于极性小的香豆素类，可用正相色谱或反相色谱；对于香豆素苷类，一般用反相色谱。检测器常选择紫外检测器。

5.气相色谱法

一些相对分子质量小的香豆素类成分具有挥发性，可利用气相色谱法进行含量测定，可用SE-30石英毛细管柱、FID检测器。