黄酮类化合物含量的分析方法优化

黄酮类化合物的定量分析方法主要有紫外分光光度法、比色法、薄层色谱法和高效液相色谱法等。

1.紫外分光光度法

黄酮类化合物结构中都含有α-苯基色原酮基本结构，羰基与2个芳香环形成2个较强的共轭系统吸收，在紫外光区有2个较强的特征吸收。大多数黄酮类化合物在甲醇中有2个主要紫外吸收光谱带：出现在300～400nm之间的吸收带称为吸收带I，来自于B环共轭；出现在240～280nm吸收带称为吸收带Ⅱ，来自于A环。根据黄酮类化合物结构的不同，其最大吸收波长也不同，可以通过特征吸收波长处的吸光值来计算含量。

某些试剂的加入，能使黄酮类化合物的特征吸收峰发生一定程度的位移。例如，黄酮醇类化合物在中性乙醇介质中与Al3+络合，使吸收带向长波移动；在醋酸钠乙醇溶液中，吸收带Ⅱ向长波移动8～20nm；在乙醇钠溶液、硼酸钠溶液中，其特征吸收均发生位移。

2.比色法(www.xing528.com)

比色法一般用于样品中总黄酮含量的测定。黄酮类化合物母核中3、5位上的羟基、B环上任何相邻的羟基，均能与Al3+、Fe3+、Sb3+、Cr2+等金属离子反应形成络合物，呈现出黄色或橙色，且多数在紫外光下有显著荧光，常被用于定量分析。最常用的方法是以芦丁为对照品，加亚硝酸钠和硝酸铝显色来测定含量。

此外，1，2-萘醌-4-磺酸（Folin试剂）等一些酚类试剂，也可与黄酮类化合物呈色。

3.薄层色谱法

薄层色谱法是测定样品中单体黄酮类成分的有效方法。可用硅胶、纤维素或聚酰胺进行色谱分离，再将含有待测组分的色斑刮下，以适当溶剂洗脱后用紫外分光光度法测定；也可以用薄层扫描仪直接在薄层板上测定。