烟草制品中总植物碱测定的连续流动硫氰酸钾法

1 范围

本标准规定了烟草及烟草制品中总植物碱（以烟碱计）的连续流动硫氰酸钾测定方法。

本标准适用于烟草及烟草制品中总植物碱（以烟碱计）的测定。

本方法测定烟草及烟草制品中总植物碱（以烟碱计）的检出限为0.045%，定量限为0.160%。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法

YC/T 31 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法

3 原理

用水萃取烟草样品，萃取液中的总植物碱（以烟碱计）与对氨基苯磺酸和氯化氰反应，氯化氰由硫氰酸钾和二氯异氰尿酸钠在线反应产生。反应产物用比色计在460nm测定。

注：用5%乙酸溶液作为萃取液亦可得到相同的结果。

4 试剂与材料

除特别要求以外，均应使用分析纯试剂，水应符合GB/T 6682中一级水的规定。

4.1 磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），纯度＞99.0%。

4.2 柠檬酸 [COH（COOH）（CH₂ COOH）₂·H₂O]，纯度＞99.0%。

硼酸钠（Na₂B₄O₇·10H₂O），纯度＞99.5%。

4.3 对氨基苯磺酸（NH₂ C₆ H₄ SO₃ H），纯度＞99.8%。

4.4 硫氰酸钾（KSCN），纯度＞98.5%。

4.5 二氯异氰尿酸钠（C₃ Cl₂ N₃ NaO₃），纯度＞95.0%。

4.6 硫酸亚铁（FeSO₄·7 H₂O），纯度＞99.0%。

4.7 碳酸钠（Na₂ CO₃），纯度＞99.8%。

4.8 烟碱，纯度＞98.0%。

4.9 Brij-35溶液（聚乙氧基月桂醚）

将250g Brij-35加入到1 L水中，加热搅拌直至溶解。

4.10 缓冲溶液A

称取65.5g磷酸氢二钠（4.1）、10.4g柠檬酸（4.2）至烧杯中，用水溶解，然后转入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，加入1mL Brij-35溶液（4.9），混匀。使用前用定性滤纸过滤。

4.11 缓冲溶液B

称取222g磷酸氢二钠（4.1）、8.4g柠檬酸（4.2）、7g对氨基苯磺酸（4.3）至烧杯中，用水溶解，然后转入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，加入1mL Brij-35溶液（4.9），混匀。使用前用定性滤纸过滤。

4.12 硫氰酸钾溶液

称取2.88g硫氰酸钾（4.4）至烧杯中，用水溶解，然后转入250mL容量瓶中，用水定容至刻度。

4.13 二氯异氰尿酸钠溶液

称取2.20 g二氯异氰尿酸钠（4.5）至烧杯中，用水溶解，然后转入250mL容量瓶中，用水定容至刻度。该溶液应现配现用。

4.14 解毒溶液A

称取1g柠檬酸（4.2）、10g硫酸亚铁（4.6）至烧杯中，用水溶解，然后转入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。

4.15 解毒溶液B

称取10g碳酸钠（4.7）至烧杯中，用水溶解，然后转入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。

4.16 烟碱标准溶液

4.16.1 标准储备液

称取适量烟碱（4.8）于250mL容量瓶中，精确至0.0001g，用水溶解，定容至刻度。此溶液烟碱含量应在1.6 mg/mL左右。标准储备液应储存于0～4℃冰箱中。有效期为一个月。

4.16.2 系列标准工作溶液

由标准储备液（4.16.1）制备至少5个系列标准工作溶液，其浓度范围应覆盖预计检测到的样品含量。该工作溶液在0～4℃冰箱中保存，有效期为2周。

5 仪器(www.xing528.com)

5.1 具塞三角瓶，50mL。

5.2 定量加液器或移液管。

5.3 快速定性滤纸。

5.4 分析天平，感量0.0001g。

5.5 振荡器。

5.6 连续流动分析仪，由下述各部分组成：

取样器；比例泵；螺旋管；透析槽；比色计，配460nm滤光片；数据处理装置。

6 分析步骤

6.1 试样制备

按YC/T 31制备试样，并测定其水分含量。

6.2 样品处理

称取0.25g试样于50mL具塞三角瓶中（5.1），精确至0.0001g，加入25mL水，盖上塞子，在振荡器（5.5）上振荡（转速＞150rpm）萃取30min。用快速定性滤纸（5.3）过滤萃取液，弃去前几毫升（2～3mL）滤液，收集后续滤液作分析之用。

6.3 仪器分析

上机运行系列标准工作溶液（4.16.2）和滤液（6.2），分析流程图参见附录A。如样品浓度超出标准工作溶液的浓度范围，则应稀释后再测定。

7 结果的计算与表述

7.1 总植物碱（以烟碱计）含量的计算

a表示以干基试样计的总植物碱（以烟碱计）的含量，数值以%表示，由式（1）计算：

式中c——萃取液总植物碱的仪器观测值，mg/mL；

v——萃取液的体积，mL；

m——试样的质量，g；

w——试样水分的质量分数，%。

7.2 结果的表述

以两次平行测定结果的平均值作为测定结果，结果精确至0.01%。两次平行测定结果绝对值之差不应大于0.05%。

8 精密度和回收率

本方法的精密度结果见表1和加标回收率结果见表2。

表1 本方法的精密度（n=6)

表2方法的低，中，高加标回收率（n=3)

9 试验报告

试验报告应包括以下内容：

——识别被测试样需要的所有信息；

——参照本标准所使用的试验方法；

——测定结果，包括各单次测定结果及其平均值；

——与本标准规定的分析步骤的差异；

——在试验中观察到的异常现象；

——试验日期；

——测定人员。

附录A

（资料性附录)

总植物碱 （以烟碱计)的连续流动硫氰酸钾法分析流程图

图A.1 总植物碱的连续流动硫氰酸钾法分析流程图（大流量）

图A.2 总植物碱的连续流动硫氰酸钾法分析流程图（小流量）