富马酸二甲酯（Dimethyl fumarate，DMF）俗称霉克星，学名反丁烯二酸二甲酯，分子式C6H8O4，纯品为白色鳞状结晶体，易升华而具有熏蒸性，对光热稳定，熔点103～104℃，沸点193℃，微溶于水，易溶于乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂。DMF具有高效、广谱抗菌、化学稳定性好、作用时间长、pH范围宽等特点。摄入较多会对眼睛刺激较大，大量摄入会导致咽痛、呕吐和腹泻等后果。DMF以前曾用作食品添加剂，2009年3月17日欧盟委员会在布鲁塞尔通过禁止在消费品中使用生物杀灭剂富马酸二甲酯（DMF）和含有富马酸二甲酯（DMF）的产品投入市场的禁令（2009/251/EC）。我国现在也将DMF列入非食用物而禁止在食品中使用。目前检测DMF的方法主要有：薄层色谱法、气相色谱法、气－质联用法。本实验介绍毛细管气相色谱法。
（一）实验原理
用二氯甲烷提取样品中的DMF，样品提取液经C18SPE柱净化，用毛细管气相色谱测定，以DMF标准品定性，外标法定量。
（二）试剂及仪器
1.试剂
二氯甲烷，无水硫酸钠，DMF标准品；AccuBond SPE ODS－C18Car—tridges即C18－SPE小柱。
2.仪器
美国Agilent 6890气相色谱仪（附FID检测器和Agilent 7683型自动进样器）；超声波振荡器；旋转蒸发仪。
（三）实验步骤
1.富马酸二甲酯标准溶液及标准使用液配制
准确称取0.1000g富马酸二甲酯标准品，用二氯甲烷溶解并定容至100mL。该溶液1mL含富马酸二甲酯1.0mg。分别吸取该溶液0.1、0.3、0.9、1.5、3.0、6.0mL至10.0mL容量瓶定容至刻度作为标准工作液待用。
2.样品前处理
①提取：准确称取粉碎试样5.000g左右于100mL三角锥瓶，加入50mL二氯甲烷，摇匀，于超声波振荡器中振荡提取5min，取出静置，将上清液用盛有无水硫酸钠的漏斗过滤至圆底烧瓶。再用30mL二氯甲烷提取一次，并转移过滤至圆底烧瓶，分两次各用10mL二氯甲烷洗三角锥瓶转移过滤至圆底烧瓶，在4℃水浴中旋转蒸发浓缩至1.0mL左右或在30℃水浴中，吹氮浓缩到1.0mL左右。
②纯化：将上述浓缩液完全转移至已用二氯甲烷预淋过的C18－SPE小柱中，再分数次用二氯甲烷淋洗小柱，合并淋洗液并定容至10.0mL。
3.测定
①色谱测定条件：色谱柱：Agilent HP－1701（30m×250μm×0.25μm）；进样口温度：250℃；检测器温度：250℃；柱温：90℃恒温10min。PostRun 250℃恒温15min；载气及流速：高纯氮气，恒流，1.5mL/min；进样量与分流比：2.0μL进样，分流比为5.0∶1。
②分别取不同浓度的校准液及样品待测液2.0μL进样，按上述测定条件进行测定。
（四）注意事项
（1）浓缩液转移时务必转移完全，可用少量二氯甲烷洗涤二次。
（2）对油脂含量少的样品可用二氯甲烷浸泡过夜、抽滤，将滤液收集起来，于30℃水浴中吹氮浓缩后，转移到硅胶柱顶部，用二氯甲烷稀释，前1.5mL弃去，收集6～7mL洗脱液，并根据含量多少进行相应的吹氮浓缩，待用。
吊白块，学名甲醛合次硫酸氢钠，是工业用增白剂，主要用于染布漂白。若作为食品脱色剂使用，会使食品中残留有害的甲醛，人体摄入甲醛后，可引起食欲减退、厌食、体重减轻、神经衰弱、失眠等症状。为此，国家已明文规定，禁止吊白块在食品中使用。但市场上吊白块使用的商品时有发现，因此有必要了解吊白块的检测方法。
（一）实验原理
在酸性条件下，对样品进行蒸馏，馏出物用水吸收，吸收液中的甲醛与乙酰丙酮及铵离子反应，生成黄色物质，与标准系列比较定量。在另一酸性条件下，对样品重新进行蒸馏，馏出物用2%乙酸铅水溶液吸收，吸收液酸化后，用碘标准溶液滴定测定二氧化硫含量。
（二）试剂
乙酰丙酮溶液：在100mL蒸馏水中加入醋酸铵25g，冰醋酸3mL和乙酰丙酮0.4mL，振摇促溶，储备于棕色瓶中，此液可保存1个月。
甲醛标准储备液：吸取10mL甲醛（38%～40%），移入500mL容量瓶中，加入0.5mL硫酸（1+35），加水稀释至刻度，混匀。吸取5mL，置于250mL碘量瓶中，加0.1mol/L碘标准溶液50mL，1mol/L KOH溶液20mL，在室温放置15min后，加10%硫酸15mL酸化，再放置15min后，加入50mL蒸馏水，用0.1mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至草黄色，加入新配制的0.5%淀粉指示剂1mL，继续滴定至蓝色消失为终点，同时做空白试验。甲醛标准储备液浓度按式（6-7）计算(www.xing528.com)
式中 C0——甲醛标准储备液浓度，mol/L；
V1——空白消耗硫代硫酸钠溶液体积，mL；
V2——标定甲醛消耗硫酸钠溶液体积，mL；
C——硫代硫酸钠浓度，mol/L。
甲醛标准使用液：将标定后的甲醛标准储备液用水稀释至5μg/mL。
（三）实验步骤
1.标准曲线制备
分别吸取0，0.50，1.00，3.00，5.00，7.00mL甲醛标准使用液（相当于0，2.5，5.0，15.0，25.0，35.0μg甲醛）于25mL比色管中，补充蒸馏水至10mL，加入1mL乙酰丙酮溶液，混匀，置沸水浴中3min，取出冷却，于415nm波长处，以零管调节零点，用1cm比色皿进行比色，根据测得的吸光值绘制标准曲线。
2.样品处理
称取经粉碎的样品5.000g左右，置于250mL蒸馏瓶中，加入蒸馏水100mL，磷酸7.5mL，立即进行加热蒸馏，冷凝管下口应事先插入盛有10mL蒸馏水且置于冰浴的容器中。收集蒸馏液约90mL，定容至100mL，另作空白蒸馏。
3.显色操作
视所检试样中吊白块含量高低，吸取上述2～10mL蒸馏液，补充蒸馏水至10mL，加入1mL乙酰丙酮溶液，混匀，然后同标准曲线制作，进行加热、测定，根据测得的吸光值，由标准曲线计算结果。
4.结果计算
试样中吊白块的含量按式（6-8）计算
式中 X——试样中吊白块的含量，mg/kg；
V1——样品管相当于标准管体积，mL；
m1——每mL甲醛标准液含甲醛量，μg；
m2——试样重，g；
V2——显色操作所取蒸馏液体积，mL；
V3——蒸馏液总体积，mL；
5.133——甲醛换算为吊白块系数。
（四）注意事项
1.目前，食品中吊白块含量的测定只是通过对食品中甲醛含量的测定来判定的，由于天然食品中也有可能存在极少量的甲醛，若测定结果发现食品中甲醛呈阳性，并不能就此说明食品中含有吊白块成分，若食品中甲醛含量较高且二氧化硫含量也相应较高时，则基本上可以判定该食品中含有吊白块成分。若在样品制备时将磷酸改为1+1的盐酸，蒸馏液用2%乙酸铅溶液吸收，通过对该吸收液二氧化硫的测定，可作为在甲醛存在情况下确定是否有吊白块的依据。
2.样品中存在的NaHSO4是否来自于甲醛次硫酸氢钠的分解产物。虽然目前尚未找到允许在面制品制作过程中使用亚硫酸氢钠作为漂白剂的国家标准。但亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫磺可被应用在饼干、干果、干菜、粉丝等数类食品的加工制作过程，从而也有可能被应用在面制食品的加工过程中。所以采用以上定量、定性两方法结果综合起来判定面制食品中是否存在吊白块时，应将亚硫酸氢钠和甲醛的测定结果综合起来判定，若同时测定面制食品中亚硫酸氢钠（以SO2计），以了解二氧化硫与甲醛实测值之比是否较接近理论上的质量比即相对分子质量之比2.1∶1.0。若接近此比值，更可断定吊白块的存在，这样得出的结论应是比较科学、准确的。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
