甜味剂是以赋予食品甜味为主要目的的食品调味剂。其分类有多种方法，按其营养价值分为营养性甜味剂和非营养性甜味剂；按其化学结构和性质分为糖类和非糖类甜味剂；按其来源分为天然甜味剂和化学合成甜味剂。合成甜味剂是人工合成的非营养性甜味剂。糖精钠、甜蜜素（环己基氨基磺酸钠）、安赛蜜（乙酰磺胺酸钾）和阿斯巴甜属于化学合成甜味剂。
食品中糖精钠的测定采用液相色谱法，按照GB/T 500928-2016的规定与食品中苯甲酸、山梨酸同时测定。
（一）测定原理
样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂，高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。
（二）试剂和仪器
1.试剂
（2）亚铁氰化钾｛K4［Fe（CN）6］·3H2O｝。
（3）乙酸锌［Zn（CH3COO）2·2H2O］。
（5）氨水溶液（1+99）取氨水1mL，加到99mL水中，混匀。
（6）亚铁氰化钾溶液（92g/L）称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000mL。
（7）乙酸锌溶液（183g/L）称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL。
（8）乙酸铵溶液（20mmol/L）称取1.54g乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至1000mL，经0.22μm微孔滤膜过滤备用。
（9）甲酸－乙酸铵溶液（2mmol/L甲酸+20mmol/L乙酸铵）称取1.54g乙酸铵，加入适量水溶解，再加入75.2μL甲酸，用水定容至1000mL，经0.22μm微孔滤膜过滤备用。
2.标准品
糖精钠（C6H4CONNaSO2·2H2O，纯度≥99%）；苯甲酸钠（C6H5COONa，纯度≥99%）或苯甲酸（C6H5COOH，纯度≥99%）；山梨酸钾（C6H7KO2，纯度≥99%）或山梨酸（C6H8O2，纯度≥99%）。
（1）糖精钠标准储备液（1000mg/L）准确称取经120℃烘干4h后的糖精钠0.117g（精确到0.0001），加水溶解定容至100mL。于4℃贮存，保存期为6个月。
（2）苯甲酸、山梨酸标准储备液（1000mg/L）分别准确称取苯甲酸钠、山梨酸钾0.118g和0.134g（精确到0.0001g），加水溶解定容至100mL。于4℃贮存，保存期为6个月。当使用苯甲酸和山梨酸标准品时用甲醇溶解并定容。
（3）糖精钠（以糖精计）、苯甲酸、山梨酸混合标准中间溶液（200mg/L）分别准确吸取糖精钠、苯甲酸和山梨酸标准储备液各10mL于50mL容量瓶中，用水定容。于4℃贮存，保存期为3个月。
（4）糖精钠（以糖精计）、苯甲酸、山梨酸混合标准系列工作溶液 分别准确吸取上述混合标准中间溶液0、0.05、0.25、0.50、1.00、2.50、5.00、10.0mL，用水定容至10mL，配制成浓度分别为0、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100、200mg/L的混合标准系列工作溶液，临用现配。
3.仪器
（1）高效液相色谱仪 配紫外检测器。
（4）离心机 转速＞8000r/min。
（三）测定步骤
1.取样
均匀的饮料、液态奶等样品，取多个预包装样品直接混合；非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀；奶酪、黄油、巧克力等采用50～60℃加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。取均匀后的样品200g装入玻璃容器中，密封，液体试样于4℃保存，其他试样于－18℃保存。
2.样品处理
（1）一般性试样 准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5min，将水相转移至同一个50mL容量瓶中，用水定容，混匀。取适量上清液过0.22μm滤膜，待测。（注：碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂）。
（2）含胶基的果冻、糖果等试样 准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于70℃水浴加热溶解试样，于50℃水浴超声20min，之后操作同（1）。
（3）油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样 准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加正己烷10mL，于60℃水浴加热约5min，并不时轻摇溶解脂肪，然后加氨水溶液25mL，乙醇1mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后，加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，弃去有机相，水相移至50mL容量瓶中，残渣操作同（1）再提取一次后测定。
3.色谱参考条件
（1）色谱柱C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效色谱柱。
（2）流动相 甲醇+乙酸铵溶液=5+95；流速：1mL/min；检测波长：230nm；进样量：10μL。
当存在干扰峰或需要辅助定性时，可以采用加入甲酸的流动相来测定，如流动相：甲醇+甲酸－乙酸铵溶液=8+92。
4.标准曲线的制作
将混合标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
5.试样溶液的测定
将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中糖精钠（以糖精计）、苯甲酸和山梨酸的质量浓度。
（四）结果计算
式中 X——样品中待测组分含量，g/kg；
ρ——由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度，mg/L；
V——试样定容体积，mL；
m——试样质量，g；
1000——由mg/kg转换为g/kg的换算因子。
计算结果保留3位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
按取样量2g，定容50mL时，糖精钠、苯甲酸和山梨酸的检出限均为0.005g/kg，定量限均为0.01g/kg。
GB 5009.97-2016规定了食品中环己基氨基磺酸钠测定的三种方法，包括气相色谱法、液相色谱法和液相色谱－质谱/质谱法。
（一）气相色谱法
气相色谱法适用于饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳熟制坚果与籽类、水果罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮品、果冻、复合调味料、腌渍蔬菜、腐乳等食品中环己基氨基磺酸钠的测定。气相色谱法不适用于白酒中该化合物的测定。
1.测定原理
食品中环己基氨基磺酸钠用水提取，在硫酸介质中与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱氢火焰离子化检测器进行分离及分析，保留时间定性，外标法定量。
2.试剂和仪器
（1）试剂
①正庚烷［CH3（CH2）5CH3］、氯化钠（NaCl）、石油醚：沸程为30～60℃。
②氢氧化钠（NaOH）溶液：40g/L。
③硫酸溶液：200g/L。
④亚铁氰化钾｛K4［Fe（CN）6］·3H2O｝溶液：150g/L。称取折合15g亚铁氰化钾，溶于水并稀释至100mL，混匀。
⑤硫酸锌（ZnSO4·7H2O）溶液：300g/L。称取折合30g硫酸锌，溶于水并稀释至100mL，混匀。
⑥亚硝酸钠（NaNO2）溶液：50g/L。称取25g亚硝酸钠，溶于水并稀释至500mL，混匀。
⑦环己基氨基磺酸钠标准储备液（5.00mg/mL）：精确称取0.5612g环己基氨基磺酸钠标准品（纯度≥99%），加水溶解并定容至100mL，此溶液1.00mL相当于环己基氨基磺酸5.00mg。置于1～4℃冰箱中保存，可保存12个月。
⑧环己基氨基磺酸钠标准使用液（1.00mg/mL）：准确移取20.0mL环己基氨基磺酸钠标准储备液用水稀释并定容至100mL。置于1～4℃冰箱中可保存6个月。
（2）仪器及设备
①气相色谱仪（配氢火焰离子化检测器）。
②涡旋混合器，离心机（转速≥4000r/min），超声波振荡器，样品粉碎机，10μL微量注射器，恒温水浴锅，天平（感量1mg、0.1mg）。
3.测定步骤
（1）取样及样品处理
①液体试样：普通液体试样：摇匀后称取25.0g试样（如需要可过滤），用水定容至50mL备用。
含CO2的试样：称取25.0g试样于烧杯中，60℃水浴加热30min以除去CO2，放冷，用水定容至50mL备用。
含酒精的试样：称取25.0g试样于烧杯中，用NaOH溶液调至弱碱性pH7～8，60℃水浴加热30min以除去酒精，放冷，用水定容至50mL备用。
②固体、半固体试样：低脂、低蛋白样品（果酱、果冻、水果罐头、果丹类、蜜饯凉果类、浓缩果汁、面包、糕点、饼干、复合调味料、带壳熟制坚果和籽类、腌渍蔬菜等）：称取打碎、混匀的样品3.00～5.00g于50mL离心管中，加30mL水，振摇，超声提取20min，混匀，离心（3000r/min）10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50mL，混匀备用。
高蛋白、高脂样品（酸乳、雪糕、冰淇淋等奶制品及豆制品、腐乳等）：冰棒、雪糕、冰淇淋等分别放置于250mL烧杯中，待融化后搅匀，称取样品3.00～5.00g于50mL离心管中，加30mL水，超声提取20min，加2mL亚铁氰化钾溶液混匀，再加入2mL硫酸锌溶液，混匀，离心（3000r/min）10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50mL，混匀备用。
高脂样品（奶油制品、海鱼罐头、熟肉制品等）：称取打碎、混匀的样品3.00～5.00g于50mL离心管中，加入25mL石油醚，振摇，超声提取3min，再混匀，离心（1000r/min以上）10min，弃石油醚，再用25mL石油醚提取一次，弃石油醚，60℃水浴挥发除去石油醚，残渣加30mL水，混匀，超声提取20min，加2mL亚铁氰化钾溶液混匀，再加入2mL硫酸锌溶液，混匀，离心（3000r/min）10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50mL，混匀备用。
（2）试样衍生化 准确移取处理好的液体试样、固体、半固体试样溶液10.0mL于50mL带盖离心管中。离心管置试管架上冰浴5min后，准确加入5.00mL正庚烷，再加入2.5mL亚硝酸钠溶液，2.5mL硫酸溶液，盖紧离心管盖，在冰浴中放置30min，期间振摇3～5次；加入2.5g氯化钠，盖上盖后置涡旋混合器上振荡1min，低温离心（3000r/min）10min分层，或低温静置20min至澄清分层后取上清液，放置于1～4℃冰箱中保存备用。
（3）标准溶液系列的制备及衍生化 准确移取1.00mg/mL环己基氨基磺酸钠标准溶液0.50、1.00、2.50、5.00、10.0、25.0mL于50mL容量瓶中，加水定容，配成标准溶液系列浓度为0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50mg/mL。临用时配制以备衍生化。准确移取系列标准溶液10.0mL进行衍生化，方法同步骤（2）。
（4）色谱条件
①色谱柱：弱极性石英毛细管柱（内涂5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.53mm×1.0μm）或等效柱。
②柱温升温程序：初温55℃保持3min，10℃/min升温至90℃保持0.5min，20℃/min升温至200℃保持3min。
③进样口：温度230℃；进样量1μL，不分流/分流进样，分流比1∶5（分流比及方式可根据色谱仪器条件调整）。
④检测器：氢火焰离子化检测器（FID），温度260℃。
⑤载气：高纯氮气，流量12.0mL/min，尾吹20mL/min。
⑥氢气：30mL/min；空气330mL/min（载气、氢气、空气流量大小可根据仪器条件进行调整）。
（5）测定方法 分别吸取1μL经衍生化处理的标准系列浓度上清液，注入气相色谱仪中，测得不同浓度被测物的相应峰面积值，以浓度为横坐标，以环己醇亚硝酸酯和环己醇两峰面积之和为纵坐标，绘制标准曲线。
在完全相同的条件下进样1μL经衍生化处理的试样待测液上清液，保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲线得到样液中的组分浓度；试样上清液响应值若超出线性范围，应用正庚烷稀释后再进样分析，平行测定次数不少于两次。
4.结果计算
式中 X——试样中环己基氨基磺酸的含量，g/kg；
ρ——由标准曲线计算出定容样液中环己基氨基磺酸的浓度，mg/mL；
m——试样质量，g；
V——试样的最后定容体积，mL。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
（二）高效液相色谱法
液相色谱法适用于饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳熟制坚果与籽类、配制酒、水果罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮品、果冻、复合调味料、腌渍蔬菜、腐乳等食品中环己基氨基磺酸钠的测定。
1.测定原理
食品中环己基氨基磺酸钠用水提取后，在强酸性溶液中与次氯酸钠反应，生成N，N－二氯环己胺，用正庚烷萃取后，利用高效液相色谱法检测，保留时间定性，外标法定量。
2.试剂和仪器
（1）试剂
①正庚烷［CH3（CH2）5CH3］和乙腈（CH3CN）：均是色谱纯。
②石油醚：沸程为30～60℃。
③硫酸溶液（1+1）：50mL硫酸小心缓缓加入50mL水中，混匀。
④次氯酸钠溶液：用次氯酸钠稀释，保存于棕色瓶中，保持有效氯含量50g/L以上，混匀，市售产品需及时标定，临用时配制。
⑤碳酸氢钠溶液（50g/L）：称取5g碳酸氢钠，用水溶解并稀释至100mL，混匀。
⑥硫酸锌溶液（300g/L）：称取折合30g硫酸锌，溶于水并稀释至100mL，混匀。
⑦亚铁氰化钾溶液（150g/L）：称取折合15g亚铁氰化钾，溶于水并稀释至100mL，混匀。
⑧环己基氨基磺酸钠标准储备液（5.00mg/mL）：精确称取0.5612g环己基氨基磺酸钠标准品（纯度≥99%），加水溶解并定容至100mL，此溶液1.00mL相当于环己基氨基磺酸5.00mg。置于1～4℃冰箱中保存，可保存12个月。
⑨环己基氨基磺酸钠标准中间液（1.00mg/mL）：准确移取20.0mL环己基氨基磺酸钠标准储备液用水稀释并定容至100mL。置于1～4℃冰箱中可保存6个月。
⑩环己基氨基磺酸钠标准曲线系列工作液：分别吸取标准中间液0.50、1.0、2.5、5.0、10.0mL至50mL容量瓶中，用水定容。该标准系列浓度分别为10.0、20.0、50.0、100、200μg/mL。临用现配。
（2）仪器和设备
①液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
②超声波振荡器、样品粉碎机、恒温水浴锅、天平（感量1mg、0.1mg）。
③离心机：转速≥4000r/min。
3.测定步骤
（1）试样溶液的制备
①固体和半固体类试样处理：称取均质后试样5.00g于50mL离心管中，加入30mL水，混匀，超声提取20min，离心（3000r/min）20min，将上清液转出，用水洗涤残渣并定容至50mL备用。含高蛋白类样品可在超声提取时加入2.0mL硫酸锌溶液和2.0mL亚铁氰化钾溶液。含高脂质类样品可在提取前加入25mL石油醚振摇后弃去石油醚层除脂。
②液体类试样处理：普通液体试样摇匀后可直接称取样品25.0g，用水定容至50mL备用（如需要可过滤）。
含CO2的试样：称取25.0g试样于烧杯中，60℃水浴加热30min以除去CO2，放冷，用水定容至50mL备用。(www.xing528.com)
含酒精的试样：称取25.0g试样于烧杯中，用NaOH溶液调至弱碱性pH7～8，60℃水浴加热30min以除去酒精，放冷，用水定容至50mL备用。
含乳类饮料：称取试样25.0g于50mL离心管中，加入3.0mL硫酸锌溶液和3.0mL亚铁氰化钾溶液，混匀，离心分层后，将上清液转出，用水洗涤残渣并定容至50mL备用。
（2）衍生化 准确移取10mL已制备好的试样溶液，加入2.0mL硫酸溶液、5.0mL正庚烷和1.0mL次氯酸钠溶液，剧烈振荡1min，静置分层，除去水层后在正庚烷层加入25mL碳酸氢钠溶液，振荡1min。静置取上层有机相经0.45μm微孔有机相膜过滤，滤液备用。
（3）色谱条件 色谱柱：C18柱，5μm，150mm×3.9mm（i. d），或同等性能的色谱柱。
流动相：乙腈+水（70+30）；流速：0.8mL/min；进样量：10μL；检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器；检测波长：314nm。
（4）标准曲线的制作 移取10mL环己基氨基磺酸钠标准系列工作液，按上述方法衍生化。取过0.45μm微孔有机相膜过滤后的溶液10μL分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作溶液的浓度为横坐标，以环己基氨基磺酸钠衍生化产物N，N－二氯环己胺峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
（5）样品的测定 将衍生化后的试样溶液10μL注入液相色谱仪中，保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲线得到试样定容溶液中环己基氨基磺酸的浓度，平行测定次数不少于两次。
4.结果计算
式中 X——试样中环己基氨基磺酸的含量，g/kg；
ρ——由标准曲线计算出试样定容溶液中环己基氨基磺酸的浓度，μg/mL；
m——试样质量，g；
V——试样的最后定容体积，mL；
1000——由μg/g换算成g/kg的换算因子。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
（三）液相色谱法－质谱/质谱法
液相色谱法－质谱/质谱法适用于白酒、葡萄酒、黄酒、料酒中环己基氨基磺酸钠的测定。
1.测定原理
酒样经水浴加热除去乙醇后以水定容，用液相色谱法－质谱/质谱仪测定其中的环己基氨基磺酸钠，外标法定量。
2.试剂及仪器
（1）试剂
①甲醇：色谱纯。
②乙酸铵溶液（10mmol/L）：称取0.78g乙酸铵，用水溶解并稀释至1000mL，摇匀后经0.22μm水相滤膜过滤备用。
③环己基氨基磺酸钠标准储备液（5.00mg/mL）：精确称取0.5612g环己基氨基磺酸钠标准品（纯度≥99%），加水溶解并定容至100mL，此溶液1.00mL相当于环己基氨基磺酸5.00mg。置于1～4℃冰箱中可保存12个月。
④环己基氨基磺酸钠标准中间液（1.00mg/mL）：准确移取20.0mL环己基氨基磺酸钠标准储备液用水稀释并定容至100mL。置于1～4℃冰箱中可保存6个月。
⑤环己基氨基磺酸钠标准工作液（10μL/mL）：用水将1.00mL标准中间液定容至100mL。放置于1～4℃冰箱中可保存1周。
⑥环己基氨基磺酸钠标准曲线系列工作液：分别吸取适量体积的标准工作液，用水稀释，配制成浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0μL/mL的系列标准工作溶液，使用前配制。
（2）仪器和设备
①液相色谱－质谱/质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。
②分析天平：感量0.1mg、0.1g。
③恒温水浴锅。
3.测定步骤
（1）试样溶液制备 称取酒样10.0g置于50mL烧杯中，于60℃水浴上加热30min，残渣全部转移至100mL容量瓶中，用水定容并摇匀，经0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。
（2）色谱条件 色谱柱：C18柱，1.7μm，100mm×2.1mm（i. d），或同等性能的色谱柱；流动相：甲醇、10mmol/L乙酸铵溶液；流速：0.25mL/min；进样量：10μL；柱温：35℃；梯度洗脱：洗脱条件如表3-2所示。
表3-2 梯度洗脱条件
（3）质谱操作条件
①离子源：电喷雾电离源（ESI）。
②扫描方式：多反应监测（MRM）扫描；质谱调谐参数优化至最佳条件，确保环己基氨基磺酸钠在正离子模式下的灵敏度达到最佳状态，并调节正、负模式下定性离子的相对丰度接近。
（4）标准曲线制作 将配制好的标准系列溶液按照浓度由低到高的顺序进样测定，以环己基氨基磺酸钠定量离子的色谱峰面积对相应的浓度作图，得到标准曲线回归方程。
（5）定性测定 在相同的试验条件下测定试样溶液，若试样溶液质量色谱图中环己基氨基磺酸钠的保留时间与标准溶液一致（变化范围在±2.5%以内），且试样定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液中定性离子的相对丰度，其偏差不超过表3-3的规定，则可判定样品中存在环己基氨基磺酸钠。
表3-3 定性离子相对丰度的最大允许偏差
（6）定量测定 将试样溶液注入液相色谱－质谱/质谱仪中，得到环己基氨基磺酸钠定量离子峰面积，根据标准曲线计算试样溶液中环己基氨基磺酸的浓度，平行测定次数不少于两次。
4.结果计算
式中 X——试样中环己基氨基磺酸的含量，g/kg；
ρ——由标准曲线计算出试样溶液中环己基氨基磺酸的浓度，μg/mL；
V——试样的定容体积，mL；
m——试样质量，g。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
此方法（GB/T 5009.140-2003）适用于汽水、可乐型饮料、果汁、果茶等食品中乙酰磺胺酸钾的测定，也适用于糖精钠的测定。检出限：乙酰磺胺酸钾、糖精钠各为4μg/mL（g）。线性范围：乙酰磺胺酸钾、糖精钠各为4～20μg/mL。
（一）测定原理
样品中乙酰磺胺酸钾、糖精钠经高效液相反相C18柱分离后，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。
（二）试剂和仪器
1.试剂
（1）甲醇；乙腈；10%硫酸溶液；中性氧化铝：层析用，100～200目。
（2）0.02mol/L硫酸铵溶液 称取硫酸铵2.642g，加水溶解至1000mL。
（3）乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准储备液（1mg/mL）精密称取乙酰磺胺酸钾、糖精钠各0.1000g，用流动相溶解后移入100mL容量瓶中，并用流动相稀释至刻度。
（4）乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准使用液 吸取乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准储备液2mL于50mL容量瓶，加流动相至刻度，然后分别吸取此液1、2、3、4、5mL于10mL容量瓶中，各加流动相至刻度，即得各含乙酰磺胺酸钾、糖精钠4、8、12、16、20μg/mL的混合标准液系列。
（5）流动相0.02mol/L硫酸铵（740mL～800mL）+甲醇（170mL～150mL）+乙腈（90mL～50mL）+10%H2SO4（1mL）。
2.仪器及设备
（1）高效液相色谱仪。
（2）超声清洗仪（溶剂脱气用）；离心机；抽滤瓶；G3耐酸漏斗；微孔滤膜（0.45μm）。
（3）层析柱 可用10mL注射器筒代替，内装3cm高的中性氧化铝。
（三）测定步骤
1.样品处理
（1）汽水 将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取样品2.5mL于25mL容量瓶中。加流动相至刻度，摇匀后，溶液通过微孔滤膜过滤，滤液备用。
（2）可乐型饮料 将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取样品2.5mL，通过中性氧化铝柱，待样品液流至柱表面时，用流动相洗脱，收集25mL洗脱液，摇匀后超声脱气备用。
（3）果茶、果汁类食品 吸取2.5mL样品，加水约20mL混匀后，离心15min（4000r/min），上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用流动相洗脱，收集洗脱液25mL，混匀后，超声脱气备用。
2.测定
（1）HPLC参考条件 分析柱：Spherisorb C18、4.6mm×150mm，粒度5μm；检测波长：214nm；流速：0.7mL/min；进样量：10μL。
（2）标准曲线的绘制 分别进样含乙酰磺胺酸钾、糖精钠4、8、12、16、20μg/mL混合标准溶液进行HPLC分析，以峰面积为纵坐标，以乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量为横坐标，绘制标准曲线。
（3）样品测定 吸取经处理后的样品溶液进行HPLC分析，测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量。
（四）结果计算
式中 X——样品中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量，mg/kg或mg/L；
ρ——由标准曲线上查得进样液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量，μg/mL；
V——样品稀释液总体积，mL；
m——样品质量或体积，g或mL。
计算结果保留两位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
（一）测定原理
根据阿斯巴甜和阿力甜易溶于水、甲醇和乙醇等极性溶剂的特点，蔬菜及其制品、水果及其制品、食用菌和藻类、谷物及其制品、焙烤食品、膨化食品和果冻试样用甲醇水溶液在超声波振荡下提取；浓缩果汁、碳酸饮料、固体饮料类、餐桌调味料和除胶基糖果以外的其他糖果试样用水提取；乳制品、含乳饮料类和冷冻饮品试样用乙醇沉淀蛋白后用乙醇水溶液提取；胶基糖果用正己烷溶解胶基并用水提取；脂肪类乳化制品、可可制品、巧克力及巧克力制品、坚果与籽类、水产及其制品、蛋制品用水提取，然后用正己烷除去脂类成分。各提取液在液相色谱C18反相柱上进行分离，用高效液相法（GB 5009.263-2016）测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
（二）试剂和仪器
1.试剂
①甲醇（CH3OH）：色谱纯。
②乙醇（CH3CH2OH）：优级纯。
③阿斯巴甜、阿力甜标准品：纯度≥99%。
④阿斯巴甜、阿力甜标准储备液（0.5mg/mL）：各称取0.025g（精确至0.0001g）阿斯巴甜和阿力甜标准品，用水溶解并转移至50mL容量瓶中，定容至刻度，置于4℃左右冰箱保存，有效期为90d。
⑤阿斯巴甜、阿力甜混合标准工作液系列的制备：将阿斯巴甜和阿力甜标准储备液用水逐级稀释成浓度均分别为100、50、25、10.0、5.0μg/mL的标准使用溶液系列。置于4℃左右的冰箱保存，有效期为30d。
2.仪器及设备
液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器；超声波振荡器；离心机（4000r/min）。
（三）测定步骤
1.取样及样品处理
（1）碳酸饮料、浓缩果汁、固体饮料、餐桌调味料和除胶基糖果以外的其他糖果碳酸饮料 称取约5g（精确到0.001g）试样于50mL烧杯中，在50℃水浴上除去二氧化碳，然后将试样全部转入25mL容量瓶中备用。
浓缩果汁：直接称取约2g试样（精确到0.001g）于25mL容量瓶中备用。
固体饮料、餐桌调味料或绞碎的糖果：称取约1g试样（精确到0.001g）于50mL烧杯中，加水10mL，超声波振荡提取20min，将提取液移入25mL容量瓶中，烧杯中再加入10mL水超声波振荡提取10min，提取并入同一容量瓶中备用。
上述容量瓶的液体用水定容，混匀，4000r/min离心5min，上清液经0.45μm水系滤膜过滤后用于色谱分析。
（2）乳制品、含乳饮料和冷冻饮品 含有固态果肉的液态乳制品需要用食品加工机进行匀浆，对于干酪等固态乳制品，用食品加工机按试样与水的质量比1∶4进行匀浆。
分别称取约5g（精确到0.001g）液态乳制品、含乳饮料、冷冻饮品、固态乳制品匀浆试样于50mL离心管，加入10mL乙醇，盖上盖子。对于含乳饮料和冷冻饮品试样，首先轻轻上下颠倒离心管5次（不能振摇），对于乳制品，先将离心管涡旋混匀10s，然后静置1min，4000r/min离心5min，上清液滤入25mL容量瓶，沉淀用8mL乙醇－水（2+1）洗涤，离心后上清液转移入同一个25mL容量瓶，用乙醇－水（2+1）定容。经0.45μm有机系滤膜过滤后用于色谱分析。
（3）果冻 对于可吸果冻和透明果冻，用玻棒搅匀，含有水果果肉的果冻需要用食品加工机进行匀浆。称取约5g（精确到0.001g）制备均匀的果冻试样于50mL的比色管中，加入25mL80%的甲醇水溶液，在70℃的水浴上加热10min，取出比色管，趁热将提取液转入50mL容量瓶，再用15mL80%的甲醇水溶液分两次清洗比色管，每次振摇约10s，清洗液并入同一容量瓶，冷却至室温，用80%的甲醇水溶液定容，混匀，4000r/min离心5min，将上清液经0.45μm有机系滤膜过滤后用于色谱分析。
（4）果蔬及其制品、食用菌和藻类 有果核的首先需要去掉果核。对于较干较硬的试样，用食品加工机按试样与水的质量比为1∶4进行匀浆，称取约5g（精确到0.001g）匀浆试样于25mL离心管中，加入10mL 70%的甲醇水溶液，摇匀，超声10min，4000r/min离心5min，上清液转入25mL容量瓶，再加8mL 50%的甲醇水溶液。重复操作一次，合并上清液，用50%的甲醇水溶液定容，经0.45μm有机系滤膜过滤后用于色谱分析。
对于含糖多的、较黏的、较软的试样，用食品加工机按试样与水的质量比为1∶2进行匀浆，称取约3g（精确到0.001g）匀浆试样于25mL的离心管中；其他试样，用食品加工机按试样与水的质量比1∶1进行匀浆，称取约2g（精确到0.001g）匀浆试样于25mL的离心管中。然后向离心管加入10mL 60%的甲醇水溶液，摇匀，超声10min，4000r/min离心5min，上清液转入25mL容量瓶，再加10mL 50%的甲醇水溶液。重复操作一次，合并上清液用50%的甲醇水溶液定容，经0.45μm有机系滤膜过滤后用于色谱分析。
（5）谷物及其制品、焙烤食品和膨化食品 用食品加工机进行均匀粉碎，称取1g（精确到0.001g）粉碎试样于50mL离心管中，加入12mL 50%甲醇水溶液，涡旋混匀，超声振荡提取10min，4000r/min离心5min，上清液转移入25mL容量瓶中，再加10mL 50%甲醇水溶液，涡旋混匀，超声振荡提取5min，4000r/min离心5min，合并上清液，用蒸馏水定容，经0.45μm有机系滤膜过滤后用于色谱分析。
（6）胶基糖果、脂肪类乳化制品、可可制品、巧克力及巧克力制品、坚果与籽类、水产及其制品、蛋制品。
胶基糖果：用剪刀将胶基糖果剪成细条状，称取约3g（精确到0.001g）试样，转入100mL的分液漏斗中，加水25mL剧烈振摇约1min，再加入30mL正己烷，继续振摇直至试样全部溶解（约5min），静置分层，将下层水相放入50mL容量瓶，然后加入10mL水到分液漏斗，轻轻振摇约10s，静置分层，水相放入同一容量瓶中，再加水重复操作1次，最后用水定容至刻度，摇匀后过0.45μm水系滤膜后用于色谱分析。
其他：用食品加工机按试样与水的质量比为1∶4进行匀浆，称取约5g（精确到0.001g）匀浆试样于25mL离心管中，加水10mL超声振荡提取20min，静置1min，4000r/min离心5min，上清液转入100mL的分液漏斗中，离心管中再加入8mL水超声振荡提取10min，静置和离心后将上清液再次转入分液漏斗中，向分液漏斗加入15mL正己烷，振摇30s，静置分层，将下层水相放入25mL容量瓶，用水定容至刻度，摇匀后过0.45μm水系滤膜后用于色谱分析。
2.色谱参考条件
①色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm；柱温：30℃；流动相：甲醇－水（40+60）或乙腈－水（20+80）；流速：0.8mL/min；进样量：20μL。
②检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器，检测波长200nm。
3.标准曲线的制作及试样测定：
将标准系列工作液分别在上述色谱条件下测定相应的峰面积（峰高），以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积（峰高）为纵坐标绘制标准曲线。
在相同的液相色谱条件下，将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
（四）结果计算
式中 X——试样中阿斯巴甜或阿力甜的含量，g/kg；
ρ——由标准曲线计算出进样液中阿斯巴甜或阿力甜的浓度，μg/mL；
V——试样的最后定容体积，mL；
m——试样的质量，g；
1000——由μg/g换算成g/kg的换算因子。
结果保留3位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。
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