漂白剂是指能够破坏、抑制食品的发色因素,使食品褪色或免于褐变的物质。根据作用机制,食品漂白剂可分为还原性漂白剂和氧化性漂白剂。还原性漂白剂实际应用较广,且多属于亚硫酸类化合物,它们都是以其所产生的具有强还原性的二氧化硫起作用。主要用于果干、菜干、动物胶、果酒、糖品、果汁的漂白。氧化性漂白剂能使着色物质氧化分解而起到漂白的作用。氧化性漂白剂除了用于面粉处理的过氧化苯甲酰等少数品种外,在我国实际应用很少。
GB 5009.34-2016《食品安全国家标准 食品中二氧化硫的测定》于2017年3月1日正式实施,此方法适用于果脯、干菜、米粉类、粉条、砂糖、食用菌和葡萄酒等食品中总二氧化硫的测定。
(一)测定原理
在密闭容器中对样品进行酸化、蒸馏,蒸馏物用乙酸铅溶液吸收。吸收后的溶液用盐酸酸化,碘标准溶液滴定,根据所消耗的碘标准溶液量计算出样品中的二氧化硫含量。
(二)试剂和仪器
1.试剂
(1)盐酸(HCl);硫酸(H2SO4);可溶性淀粉[(C6H10O5)n];氢氧化钠(NaOH);碳酸钠(Na2CO3);乙酸铅(C4H6O4Pb);硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)或无水硫代硫酸钠(Na2S2O3);碘(I2);碘化钾(KI)。
(2)盐酸溶液(1+1)取50mL盐酸,缓缓倾入50mL水中,边加边搅拌。
(3)硫酸溶液(1+9)取10mL硫酸,缓缓倾入90mL水中,边加边搅拌。
(4)淀粉指示液(10g/L)称取1g可溶性淀粉,用少许水调成糊状,缓缓倾入100mL沸水中,边加边搅拌,煮沸2min,放冷备用,临用时现配。
(5)乙酸铅溶液(20g/L)称取2g乙酸铅,溶于少量水中并稀释至100mL。
(6)重铬酸钾(K2Cr2O7)标准品 纯度≥99%。
(7)硫代硫酸钠标准溶液(0.1mol/L)称取25g含结晶水的硫代硫酸钠或16g无水硫代硫酸钠溶于1000mL新煮沸放冷的水中,加入0.4g氢氧化钠或0.2g碳酸钠,摇匀,贮存于棕色瓶内,放置两周后过滤,用重铬酸钾标准溶液标定其准确浓度。
(8)碘标准溶液[c(1 /2I2)=0.10mol/L]称取13g碘和35g碘化钾,加水约100mL,溶解后加入3滴盐酸,用水稀释至1000mL,过滤后转入棕色瓶。使用前用硫代硫酸钠标准溶液标定。
(9)重铬酸钾标准溶液[c(1 /6K2Cr2O7)=0.1000mol/L]准确称取于(120± 2)℃干燥至恒重的重铬酸钾4.9031g,溶于水并转移至1000mL量瓶中,定容。
(10)碘标准溶液[c(1 /2I2)=0.01000mol/L]将0.1000mol/L碘标准溶液用水稀释10倍。
2.仪器和设备
(1)全玻璃蒸馏器500mL,或等效的蒸馏设备。
(2)酸式滴定管25mL或50mL。
(3)剪切式粉碎机。
(4)碘量瓶500mL。
(三)测定步骤
1.取样及预处理
对于固体样品,称取5g均匀样品(精确至0.001g,取样量可视含量高低而定),液体样品可直接吸取5.00~10.00mL样品,置于蒸馏烧瓶中。加入250mL水,装上冷凝装置,冷凝管下端插入预先备有25mL乙酸铅吸收液的碘量瓶的液面下,然后在蒸馏瓶中加入10mL盐酸溶液,立即盖塞,加热蒸馏。当蒸馏液约200mL时,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏1min。用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端。同时做空白试验。
2.滴定
向取下的碘量瓶中依次加入10mL浓盐酸、1mL淀粉指示液,摇匀之后用碘标准滴定溶液(0.010mol/L)滴定至变蓝且在30s内不褪色为止,记录消耗的碘标准溶液体积。
(四)结果计算
式中 X——样品中的二氧化硫总含量(以SO2计),g/kg或g/L;
V——滴定样品所用碘标准滴定溶液的体积,mL;
V0——滴定空白所用碘标准滴定溶液的体积,mL;
m——样品质量或体积,g或mL;
0.032——1mL碘标准溶液[c(1 /2I2)=1.0mol/L]相当于二氧化硫的质量,g;
c——碘标准溶液浓度,mol/L。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,当二氧化硫含量≥1g/kg(或1g/L)时,结果保留三位有效数字;当二氧化硫含量<1g/kg(或1g/L)时,结果保留两位有效数字。(www.xing528.com)
方法的检出限:当取5g固体样品时,检出限(LOD)为3.0mg/kg,定量限为10.0mg/kg;当取10mL液体样品时,检出限(LOD)为1.5mg/L,定量限为5.0mg/L。
GB/T 22325-2008规定了高效液相色谱法测定小麦粉中过氧化苯甲酰含量的方法。本方法最低检出限为0.5mg/kg。
(一)测定原理
由甲醇提取的过氧化苯甲酰,用碘化钾作为还原剂将其还原为苯甲酸,高效液相色谱分离,在230nm下检测。
(二)试剂和仪器
1.试剂
本标准所用试剂除特别注明外,均为分析纯试剂,实验用水应符合GB/T 6682规定的一级水要求。
(1)甲醇 色谱纯。
(2)碘化钾溶液500g/L水溶液(质量浓度)。
(3)苯甲酸标准品 纯度≥99.9%。
(4)乙酸铵缓冲溶液(0.02mol/L)称取乙酸铵1.54g用水溶解并稀释至1L,混匀后用0.45μm的滤膜过滤后使用。
(5)苯甲酸标准贮备溶液(1mg/mL)称取0.1g(精确至0.0001g)苯甲酸,用甲醇稀释至100mL。
2.仪器及设备
高效液相色谱仪:配有紫外检测器;色谱柱:C18反相柱;旋涡混合器;溶剂过滤器;天平。
(三)测定步骤
1.样品制备
称取样品5g(准确至0.1mg)于50mL具塞比色管中,加10.0mL甲醇,在旋涡混合器上混匀1min,静置5min,加50%碘化钾水溶液5.0mL,在涡旋混合器上混匀1min,放置10min。加水至50.0mL,混匀,静置,吸取上层清液通过0.22μm滤膜,滤液置于样品瓶中备用。
2.标准曲线的制备
准确移取苯甲酸标准储备液0、0.625、1.25、2.50、5.00、10.00、12.50、25.00mL分别置于8个25mL容量瓶中,分别加甲醇至25.0mL,配成浓度分别为0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、500.0、1000.0μg/mL的苯甲酸标准系列溶液。
分别称取8份5g(精确至0.1mg)不含苯甲酸和过氧化苯甲酰的小麦粉于8支50mL具塞比色管中,分别准确加入苯甲酸标准系列溶液10.00mL,其余操作同“1.样品制备”中“在旋涡混合器上混匀1min”以下叙述。标准液的最终浓度分别为:0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、100.0、200.0μg/mL。依次取不同浓度的苯甲酸标准液10.0μL,注入液相色谱仪,以苯甲酸峰面积为纵坐标,以苯甲酸浓度为横坐标,绘制标准曲线。
3.色谱参考条件
色谱柱:4.6mm×250mm,C18反相柱(5μm)(为了延长柱子寿命,建议加C18保护柱);检测波长:230nm;流动相:甲醇∶水(含0.02mol/L乙酸铵)为10∶90(体积分数);流速:1.0mL/min;进样量:10.0μL。
4.测定
取10.0μL样品溶液注入液相色谱仪,根据苯甲酸的峰面积从工作曲线上查取对应的苯甲酸浓度,并计算样品中过氧化苯甲酰的含量。
(四)结果计算
式中 X——样品中过氧化苯甲酰的含量,g/kg;
ρ——由工作曲线上查出的样品测定液中相当于苯甲酸的浓度,μg/mL;
V——样品提取液的体积,mL;
m——样品质量,g;
0.992——由苯甲酸换算成过氧化苯甲酰的换算系数:242.2/(2×122.1)。
结果保留两位有效数字。小麦粉中过氧化苯甲酰的含量在0.00~0.20mg/kg范围。
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过重复性限(r),本方法的重复性限计算:r=4.7964+0.0594x(x——两次测定值的平均值,mg/kg)。
如果差值超过重复性限,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。
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