植物根部病害抗性接种方法

1. 根肿病人工接种抗性鉴定

（1）休眠孢子的提取方法

采集根肿病发病根瘤，于-20℃保存。休眠孢子按照常规方法稍做修改进行提取，并采用血球计数板计算孢子密度。具体如下：

取50克油菜根肿病发病肿根，清洗干净表面泥土，加入灭菌水并用料理机充分搅拌磨细；用4层纱布进行过滤，滤液转移到50毫升离心管中；4000转/分钟离心10分钟，弃上清；沉淀用灭菌水洗2次；沉淀中加入10毫升50%蔗糖溶液，4000转/分钟离心10分钟；将上清转移到新的离心管中，加30毫升灭菌水，4000转/分钟离心10分钟，弃上清；沉淀用30毫升灭菌水洗2次，并溶于10毫升灭菌水中备用。

（2）菌土接种法抗性鉴定

土壤121 ℃高压灭菌处理30分钟，待冷却拌匀后重复灭菌一次；土壤称重后进行拌土，使其休眠孢子的密度为5×106～1×107个/克土，pH值调节为5.4～6.5；带菌土壤装入穴盘中，每盘中播种10粒种子，在人工气候箱中光照培养，26 ℃培养；每份材料设3个重复，并设抗、感病对照。出苗40天后，浇足水将植株完整的拔出，清洗根部后进行发病统计调查。(www.xing528.com)

（3）灌根法

种子种植于无菌育苗基质中，待长至两叶一心时，取5毫升配置好的悬浮液（每毫升休眠孢子悬浮液含1×107个休眠孢子），灌入植株根际周围，对照灌入等量的无菌水。苗龄45天时进行发病情况调查。灌根法操作方便，植株发病稳定。

2. 田间自然法抗性鉴定

选择历年根肿病发病严重的田块进行抗性鉴定试验，每份材料设3个重复，种植3行以上，并设抗、感病对照，分别在苗期、薹期和收获期浇水后整行完整拔出，根部清洗干净后进行病害调查与统计。