DNA提取试剂与步骤，琼脂糖凝胶测DNA质量

所需试剂：

①LG Buffer 1（pH值8.0）：Tris base 43.61克，EDTA 16.75克，SDS 18克，加水至1.8升。注意：加浓盐酸调节pH值为8.0。

②LG Buffer 2：NH4AC 577.5克加水至1升。

提取步骤：

（1）取样

取50毫克左右的油菜叶片（2～3个大拇指盖大小），置于2毫升离心管中，加入瓷珠2颗。

（2）磨样

每管中加入400微升LG Buffer1（若对DNA质量要求较高，可在LG Buffer1中加入1/100的RNA酶）。置于磨样机上磨样，时间2分钟。注意：如果叶片较少，可按比例减少LG Buffer1的量和磨样时间。(www.xing528.com)

（3）提取

①12000转/分钟，离心5分钟（减少管中的泡沫）。每管中加入200微升LG Buffer2，振荡均匀。-20℃静置10分钟。注意：LG Buffer2的量为LG Buffer1的1/2，所以如果LG Buffer1的量有所减少，LG Buffer2也要相应减少。后续吸上清及加异丙醇的量也需要相应减少；颠倒混匀即可，要充分混匀。不需要-20℃静置处理。

②12000转/分钟，离心15分钟。吸350微升上清于另一干净的1.5毫升离心管中，加入350微升异丙醇（1∶1添加，加异丙醇须在通风橱操作），颠倒混合均匀。注意：以上步骤结束后，可继续开展后续工作，也可以暂停实验并将样品置于-20℃冰箱中；吸上清时注意不要吸到残渣。

③12000转/分钟，离心15分钟。弃上清，加入500微升75%乙醇，在振荡器上充分振荡。注意：倒掉上清时注意在纸巾上倒扣一下，去除残液。洗涤时不需要振荡，上下颠倒两次即可，小心丢失样品DNA。

④12000转/分钟，离心10分钟。弃上清，将DNA倒扣晾干， 也可以置于超净工作台吹干。注意：如果时间紧急需要快速晾干DNA，可以将残余的乙醇用离心机甩到管底，再用10微升移液器将乙醇吸出（注意不要吸走沉淀），再置于超净工作台吹5～8分钟即可。

⑤加入60～100微升TE（或ddH2O）溶解DNA，利用琼脂糖凝胶检测DNA质量，较高质量的DNA样品需要有明显的主带，最好没有降解。检测后的DNA样品置于4℃（短期内使用）或-20℃（长期保存）。