根肿病抗性种质的创制的介绍

1. 材料

抗性亲本：“康根51”（大白菜商品种）、“ECD02”（国外引进）、“ZHE-226”（由华中农业大学张椿雨教授提供）；感病亲本：甘蓝型油菜纯系种质材料“10159”等（云南省农业科学院经济作物研究所创制获得）。

2. 方法

（1）种质创制

亲本材料种植于云南省农科院试验基地。由于抗性亲本材料冬性较强，与本课题组创制的甘蓝型油菜生育期相差较大，表现为：一方花期时另一方已终花或尚未开花。为使父母本花期相遇以便进行杂交，可采取以下措施：（1）抗性亲本于9月中下旬播种，早熟的甘蓝型油菜亲本推迟播种，于10月初播种且间隔一周分期播种，若花期仍不遇则通过不同深度打薹处理延迟开花时间；（2）抗性亲本苗期在人工气候箱中低温春化处理，之后再进行移栽使花期提前。田间管理参照油菜种植方法进行。

花期时，于杂交前2～3天选择3～4枝父本花序，摘除已开花的花蕾并采用羊皮纸袋进行套袋用于取花粉；母本植株上选择适宜大小的花蕾手工剥花蕾去除雄蕊，羊皮纸袋套袋；人工去雄第2、3天分2次取套袋植株的花粉重复授粉于柱头上，套袋并挂牌记录。授粉6～7天后取下纸袋并在杂交枝上系红线进行标记，待籽粒成熟后剪下杂交枝，收获时避免种子混杂。所获得的种子即为F1。

亲本材料、F1代种子进行根肿病抗性鉴定后移栽种植。初花后以F1为母本，甘蓝型油菜亲本为轮回亲本进行回交，获得BC1；F1套袋自交后获得F2种子。种质创制过程中同时进行抗性筛选鉴定，未发病株移栽后进行回交和套袋自交。具体创制过程详见图3-1。

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图3-1　根肿病种质创新与评价技术路线

（2）根肿病抗性鉴定

田间自然鉴定法根肿病抗性鉴定：在根肿病发病严重的田块进行根肿病抗性鉴定。每份材料设3个重复，并以“康根51”和甘蓝型油菜“花油8号”为抗、感病对照，每20份材料设一组对照。于苗期进行病害调查与统计。

菌土接种法抗性鉴定：在人工气候箱中26℃光照培养；每份材料设3个重复，并以“康根51”和“花油8号”为抗、感病对照。出苗40天后，浇足水将植株完整地拔出，清洗根部后进行发病统计调查。

3. 结果

通过种间杂交和小孢子培养创制获得一批新的种质，在低世代时在形态学上存在性状分离。采用田间自然鉴定法和实验室菌土接种法相结合的方法进行接种鉴定，对创制获得的种间杂交后代进行了根肿病抗性鉴定评价和验证。

6份种间杂交材料表现为高抗，分别为：FR137、FR139、R015、R050、R150和R322，发病率为6.67%～13.30%，病情指数为5.83～7.50，其中FR137、FR139是以“ZHE-226”为抗原创制获得的，R015、R050是以“ECD02”为抗原创制获得的，R150和R322是以“康根51”为抗原创制获得的。这些种质为F3和F4代，还存在性状和抗性分离，有待进一步进行纯化和抗性鉴定。