分子生物学技术鉴定病毒基因组类型

四、分子生物学鉴定

目前，分子生物学在植物病毒检测中得到了深入研究和应用，其中核酸电泳分析技术、多聚酶链式反应技术、核酸分子杂交技术等分子生物学检测技术发展较快。

（一）核酸电泳分析技术

核酸电流分析技术在植物类病毒检测中应用较多，植物类病毒多为环状的RNA病毒，内部碱基高度互补。在自然情况下呈棒状或三叶草状二级结构，电泳时迁移速度相对较快，但在变性条件下其二级结构遭到破坏，电泳时迁移减慢，能与其他小分子物质分开，表现出类病毒的特有电泳条带。待测样品RNA粗提液经过提纯、电泳、染色步骤后，在凝胶上显示出类病毒组特异性谱带。通过观察有无类病毒条带判断结果。

（二）多聚酶链式反应技术(www.xing528.com)

多聚酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术是在寡核苷酸引物和DNA聚合酶作用下模拟自然DNA复制的一种体外快速扩增特定基因或DNA序列的一种分子生物技术，该技术在近十年中发展十分迅速。病毒根据其基因组核酸类型的不同可分为DNA病毒和RNA病毒。对于DNA病毒，提取待测植物样品总核酸后可直接进行PCR技术扩增；但对基因组为RNA的病毒和类病毒，必须先在反转录酶的作用下反转录合成病毒互补DNA（cDNA），然后再进行PCR扩增。后者通常又被称为反转录PCR检测技术。植物病毒多为RNA病毒，所以在植物病毒检测实践中反转录PCR检测技术多用。该技术与ELISA相比，无需制备抗体，检测所需病毒量也较少，同量具有灵敏、快速、特异性强等优点，是目前较精确和有前途的病毒检测方法。

（三）核酸分子杂交技术

核酸分子杂交技术其基本原理是：两条互补核酸单链的碱基可相互配对形成双链。两条不同来源的核酸单链在一定的条件下（适宜的温度及离子强度等）可通过碱基互补原则配对产生双链，此过程被称为核酸杂交，此杂交过程具有高度特异性。根据碱基互补配对原理，先对一已知核酸片段进行标记，然后利用已知核酸片段检测待检样品是否含与该片段互补的核酸来判断是否含毒的检测手段，被称为核酸分子杂交技术，其中带标记已知核酸片段通常被称为核酸探针。