四、其他脱毒方法
(一)愈伤组织培养脱毒
通过植物器官或组织离体培养脱分化诱导获取愈伤组织,再诱导愈伤组织再分化产生新个体,来获得无病毒苗的方法,即愈伤组织培养脱毒法。其脱毒的主要理论依据为:愈伤组织细胞分裂增殖速度快,而病毒复制速度较慢,赶不上细胞的繁殖。
由于愈伤组织脱毒容易造成植株遗传不稳定,再分化产生的新个体中可能会出现变异植株。与此同时,部分植物的愈伤组织再分化产生新个体十分困难。所以,愈伤组织脱毒法很少单独使用。
(二)珠心胚培养脱毒
不少柑橘类植物种子存在多胚现象,多胚种子内往往只含有一个是受过精的有性胚(合子胚),其余的均为无性胚即通常所说的珠心胚。植物病毒通常是通过维管束的韧皮细胞传播的,而珠心胚与维管束系统无直接联系,由其离体培养诱导产生的新植株一般不带病毒,通过分离培养珠心胚可获得无病毒苗。珠心胚培养获得的无毒苗可基本保持母本原有的优良种性,但仍存在一定的不足,珠心培养苗不易度越童期,开花结果相对较迟。
(三)化学处理脱毒
化学处理脱毒,即通过抗病毒剂化学处理,来获取植物无毒材料的一种脱毒方法。其脱毒理论依据为:植物材料通过抗病毒剂处理,体内的病毒复制及转移被抑制,新生的植物材料很可能不带病毒,再结合病毒检测,繁殖脱毒材料,可获取无病毒苗。目前常用的抗病毒剂主要有:
1.氮唑核苷(www.xing528.com)
氮唑核苷的学名全称为:1,2,4-三唑-3酰胺-1-β-D-呋喃核苷,商品名叫抗病毒醚(riba-virin)或病毒唑(virazole),是人工合成的核苷类抗病毒剂,它对DNA或的RNA植物病毒具有广谱抑制作用。
2.DHT
DHT的化学名全称为:全氢化-1,3,5-三嗪-2,4-二酮,能有效抑制植物体内病毒复制和移动。
(四)低温脱毒
植物低温脱毒又叫低温疗法、冷疗法,它是基于植物超低温保存中对细胞的选择性破坏原理,结合植物组织培养技术获取脱毒植物材料的一种脱毒方法。其脱毒理论依据为:含病毒植物细胞的液泡较大,胞液中含有的水分也较多,在超低温处理过程中易被形成的冰晶破坏致死;而增殖速度较快的分生组织细胞液泡小,含水分相对少,胞质较浓,抗冻性相对强,不易被冻死。超低温离体保存处理后的植株材料离体培养诱导再生的新植株理论上不含病毒。
植物茎尖分生组织细胞分化程度较小,在超低温离体保存后的组培诱导分化过程中较易保持取样母本的遗传种性,植物茎尖材料低温疗法脱除病毒技术手段较受关注。但与此同时,该项技术研究应用发展历史还较短,脱毒成功的植物案例还很少,许多问题如具体植物材料适用的低温处理方式、处理后材料解冻处理方案、材料组培诱导再生技术流程以及低温引起的遗传和表观遗传现象等等,均有待于深入研究和探索。植物茎尖材料低温疗法更多的还是应用于植物材料保存。
除上述几种脱毒技术外,还有花药培养脱毒、热处理结合茎尖培养、热处理结合茎尖微芽嫁接、抗病毒基因工程等多种脱毒技术被研究应用。植物脱毒技术的使用常常是多种脱毒技术结合使用,才会取得更有效的脱毒效果。
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