植物增殖和分化实验步骤及成果观察记录

四、实验内容与步骤

1．材料与方法

选取健壮新生芽（苗）作为供试外植体，先用自来水冲洗30min，再用肥皂水浸泡20min。用自来水冲洗干净后，置于超净工作台，用75%酒精消毒15s，再用5%次氯酸钠溶液浸泡15min后，用无菌水冲洗4次，用无菌吸水纸吸干水分后，剥取茎尖生长点作为诱导类原球茎的外植体。

MS为基本培养基，附加蔗糖20g·L^－1，琼脂7g·L^－1，pH5.4～5.8，培养条件为温度25±2℃，光照强度2000lx，光照时间为12h·d^－1。

2．培养基

类原球茎诱导培养基：MS＋6-BA2.0mg·L^－1＋NAA0.2mg·L^－1＋椰乳汁150g·L^－1。

增殖和芽的分化培养基：MS＋6-BA1.0mg·L^－1＋NAA0.5mg·L^－1。

壮苗生根培养基：1／2MS＋NAA1.0mg·L^－1＋黄瓜汁120g·L^－1＋活性炭2g·L^－1＋蔗糖20g·L^－1，pH5.8。光强2500lx，温度25±2℃，光照14h·d^－1。

移栽基质：水苔。

3．结果观察记录(www.xing528.com)

（1）原球茎诱导

将茎尖接入原球茎诱导培养基，30d后每芽计算平均诱导原球茎数量和诱导率。

（2）原球茎增殖和芽的分化

将诱导出的原球茎接入原球茎增殖和芽的分化培养基，30d后，分别计算原球茎增率和芽分化率。

（3）壮苗生根

无根苗长到2～3cm时，分株接入壮苗生根培养基，60d后，计算生根率和平均根金数／株及株高。

（4）移栽

前先将瓶苗置于室温炼苗7～10d，然后打开瓶盖继续炼苗2～3d，洗净根部，用0.1%高锰酸钾溶液浸泡3min，定植在已消毒的水苔。空气湿度80%，60d后，计算成活率。