苹果组织培养成果及技术流程简述

四、苹果的组织培养

苹果的组织培养是采用无菌培养技术，将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片、鳞片、块根和球茎等器官以及它们的组织切片进行离体培养，使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。由于离体技术处理严格，所以很容易脱除一些细菌病原及病毒，是复壮品种的有效措施。已成功脱除的病毒和病害有苹果褪绿叶斑病毒、花叶病病毒、轮纹病等。苹果矮化砧、抗寒砧的组织培养也已成功。苹果脱毒组培技术流程具体如下。

1．外植体材料选择与处理

早春，将上年芽接或切接的盆栽长富2号苹果苗移入温室，待新梢长出3～5片新叶时，放入热处理箱中，37℃恒温热处理30d或32℃与37℃每8h变换一次，变温热处理60d。脱毒率可达80%以上。热处理结束后，从盆栽苗嫩梢上采集生长旺盛、长约2～3cm顶梢，流水冲洗10min，去掉小叶。70%乙醇浸泡30s，蒸馏水冲洗后放入0.1% HgCl₂中消毒10min，无菌水冲洗3～5次，解剖镜下迅速剥取1.0mm的茎尖进行分离培养，接种于起始培养基上。

2．培养基制备

（1）芽诱导

适宜苹果芽诱导培养基为：MS＋6-BA 1.0mg·L^－1＋NAA0.1mg·L^－1。诱导的芽生长正常可发育成新梢。

（2）继代培养(www.xing528.com)

选择诱导的芽丛切割成单芽茎段，转接于设计的继代培养基上。适宜的苹果继代培养基为：MS＋6-BA 1.0mg·L^－1＋NAA 0.05mg·L^－1＋白糖4%＋琼脂0.36mg·L^－1。培养条件：光照强度2000～2500lx，光照时间14～16h·d^－1，适宜温度为25℃±2.0℃。40d后增殖6.1倍。

（3）生根培养

选择生长正常的继代培养苗，剪成单芽茎段，插入生根培养基中，苹果适宜的生根培养基为：1／2MS＋IAA 1.5mg·L^－1＋白糖25%＋琼脂0.36%。培养30d后，平均4～6条根／苗，长达0.5～1.0cm。根白且粗，多直接生于茎基部。

3．培养条件

温度26～30℃，光照强度1500～2000lx，10h·d^－1。

4．炼苗、移栽

强光闭瓶锻炼生根苗20～25d，不定根长至1cm时，将培养瓶移至自然强光下，不去封口膜继续培养20d左右，使试管苗幼茎更加充实健壮。光太强时可遮阴，控制温度在35℃以下。闭瓶锻炼后开瓶锻炼，除去封口膜，继续锻炼2～5d，使试管苗适应低湿环境。然后从瓶内取出经过锻炼生根的试管苗，洗去根部的培养基，移栽于营养钵中（基质为田园土∶腐熟发黑锯末∶河沙＝1∶2∶1混合配制），于温度25℃的塑料大棚中培育。将营养钵小苗放在塑料大棚内加盖有薄膜的小拱棚内，早晚各洒水1次，1～3d保持相对湿度在85%以上，基质水分不宜过多。1周后开始逐渐揭膜通风，直至完全除去薄膜。过渡移栽约30d，地上部分生长到10cm左右时可移至大田。