1.外植体材料选择与处理
选果梳整齐、果实大小均匀、产量高、无病虫害症状的健康母株的吸芽(注:吸芽苗是从地下球茎上萌发、生长成苗的各类苗的总称,可以分为:褛衣芽,秋后春前发生的吸芽,是传统无性繁殖春植最好的种苗;红笋,春暖后露出地面的吸芽,因其色泽嫩红而得名,是3月至5月定植的常用种苗;隔山飞,收获后植株球茎上长出的吸芽;大叶芽,收获后的隔年旧球茎上抽出的吸芽,通常不宜用作种苗)。挖取吸芽时,宜稍靠近母株,在早春与秋季干旱季节采芽。从蕉园采取的吸芽用自来水冲洗干净,用不锈钢解剖刀切去吸芽的根和顶端,剥去外层,切成高3cm左右的圆柱体(见彩页图5-7)。在超净工作台上,用75%的酒精消毒2min,再用0.1%的高汞消毒15~20min。消毒液应浸没圆柱体,并经常翻动圆柱体,以便充分灭菌。消毒后,立即用无菌水漂洗5次,冲净消毒液。
2.各组培阶段处理
初代培养:用解剖刀剥除外层叶鞘,留3~4cm的基座,将基座十字形切成4块,每块带有1~2个芽原基,接入诱导培养基中进行初代培养,基本培养基MS+糖30g·L-1+琼脂6.0g·L-1,pH调至5.8。最佳诱导培养基:MS+6-BA4.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+糖30g·L-1+琼脂6.0g·L-1。
继代培养:在继代繁殖中,为减弱顶端优势,促进基盘腋芽生长,转接时将丛生苗的大部分假茎叶切除,并将基部切成含有2~4个芽的芽丛转接到继代培养基中,继代培养基配方:MS+6-BA4.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1,温度25℃~28℃,光照1000~2000lx,12h·d-1,30d后增殖4~7倍。(www.xing528.com)
壮苗生根培养:壮苗培养基为MS,经过30~40天的壮苗培养,然后转入生根培养基中,即MS+NAA0.1mg·L-1+糖25.0g·L-1+琼脂6.0g·L-1,培养20~30d即可转入室外炼苗。
3.室外炼苗
炼苗采用拱形薄膜大棚,大棚四周覆盖防虫网,里层为薄膜,外层为遮阳网,基质用肥土即可。种植前应先将基质淋透水,将苗根平展移栽、压实,浇足定根水。假植苗对水分要求较高,种植后10d内每天浇水一次。之后采用干湿交替控制基质水分,高温、干燥时应开门通风,喷水降温、增湿。假植苗生长后期要适当控制水分。假植苗生长前期苗势较弱,对肥料要求不高,应薄肥勤施、叶面追肥,如喷施0.2%磷酸二氢钾等,同时注意防病治虫,每隔10~15d喷施氧化乐果1000倍液或百菌清1000倍液一次。小苗长至5~7片新叶、假茎高20cm时,即可出圃定植。出圃前掀开薄膜和遮阳网炼苗15~20d,有利于大田种植成活。
香蕉材料褐变是香蕉组培中的一大障碍。用10~20mg·L-1的Vc浸泡吸芽茎尖10~15min效果明显。另外,培养基中添加0.5~2.0mg·L-1活性炭亦有效但用量不能超过2.5mg·L-1,否则外植体的出苗率的下降。选择处于旺盛生长的外植体,接种后1~4周内在黑暗或光照强度150lx左右条件下培养,或采取连续转移的办法,可以减轻酚类物质的毒害作用,生产上主要采取这一方法来减轻褐变。
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