四、实验实训步骤
（一）培养基配制的一般流程
培养基配制的一般流程如图2-5所示。
图2-5 配制培养基的工艺流程
（二）具体操作步骤
1．确定配方及培养基用量
培养基配制前，首先要根据培养对象、培养部位、培养方式确定培养基配方，然后根据培养材料和实验处理的多少，确定培养基用量。
2．称取蔗糖、琼脂
根据琼脂粉或琼脂的凝固强度和自己的一些经验，确定琼脂粉或琼脂的用量。一般进口的琼脂粉的用量为0.5%左右，国产的琼脂粉的用量在0.8%左右；琼脂条用量一般在0.8%～1.2%，具体视琼脂产品的产地、厂家及凝固强度等物理参数而定。蔗糖的用量一般在2%～3%（可用白砂糖代替）。根据配制培养基的体积，计算琼脂条或琼脂粉的用量，然后用托盘天平分别称取。
3．琼脂条或琼脂粉的熔化
首先用约100～150ml温水（约35℃）润化琼脂粉或琼脂条约3分钟，然后倒入已经量取所配制培养基体积70%左右的蒸馏水容器中，开始猛火加热，待沸腾后再文火煮溶，并经常搅拌，防止煳锅底和溢出，使琼脂熔化（其标志是溶液澄清透明），再加入已经称取的蔗糖，继续加热。（注：若采用电磁炉溶解琼脂，则可极大缩短配制培养基的时间，具体方法是先将电磁炉设定160℃，然后加热70%培养基体积的水→加入琼脂粉→搅拌→待沸腾时→端离电磁炉→等沸腾液冷却下来后→又加热→这样反复2～3次→将微波炉调至80℃→直至琼脂完全溶化）
4．移取母液
（1）计算
根据培养基配制量，计算各母液移取量。其具体计算可按以下公式计算：
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培养基中激素和MS母液的用量计算，以配方MS＋NAA0.5mg·L－1＋NAA0.1mg·L－1计算配制2L培养基所需的NAA和大量元素Ⅱ为例：先求出NAA所需的质量＝0.5mg·L－1×2L＝1mg，然后按下列公式计算移取的NAA和大量元素Ⅱ（其浓度以图2-5标签所标注的为准）母液体积：
（2）移取
按照大量元素母液、铁盐母液、微量元素母液、有机物母液、激素类母液的顺序和移取量，用吸量管分别依次将母液移入步骤2.3中琼脂已经溶化的溶液中（注意，吸量管每种母液要专用，不要混用，否则会导致母液成分发生变化，从而影响实验结果）。
5．定容
将熬好的培养基倒入1000ml容量瓶或量筒中定容。
6．pH调整
待培养基温度下降至65～75℃时，用酸度计或pH试纸测试pH值，通过滴加0.2mol·L－1NaOH或0.2mol·L－1HCl溶液，调整pH到规定值。灭菌前一般将培养基的pH值调整到6.0～6.2左右。
7．分装与封口
趁热分装。用注射器将调好pH值的液体培养基分灌装到培养瓶内，培养基的装量厚度约1.5～3cm，视容器的横截面积和培养时间而定，横截面积越大和培养时间越长，则厚度要厚一些（装量大一些），反之，装量厚度要薄一些。分装后立即加盖或用线绳扎紧耐高温聚丙烯塑料封口膜（也可用棉塞等其他封口材料）。注意预先检查好高压聚丙烯薄膜封口有无破损之处。
8．标识与记录
在培养瓶上贴上标签或用记号笔在瓶壁上注明培养基的代号、配制时间等，然后用周转筐运至灭菌室，准备灭菌。另外，要填好培养基配制登记表（见表2-7）。
表2-7 培养基配制登记表
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