石杉碱甲的柱色谱和HPLC分离精制方法

15.6.5　石杉碱甲

石杉碱甲（huperzine A，Hup-A）是从石杉科植物蛇足石杉中提取的一种石松生物碱，是一种强效的胆碱酯酶可逆性抑制剂，在治疗阿尔茨海默病（A lzeheimer's disease，AD）、增强学习记忆、改善空间记忆障碍等方面有明显的效果。

1.化学结构

2.理化性质

（1）性状：石杉碱甲为无臭、味微苦，白色或类白色精细粉末，分子式C₁₅ H₁₈ N₂ O，相对分子质量242.32，熔点224～229℃。

（2）溶解性：石杉碱甲易溶于甲醇，溶于乙醇等有机溶剂，难溶于水。

3.石杉碱甲生产工艺

【工艺原理】

石杉碱甲具有中等强度的碱性，可与酸结合成盐，本工艺通过有机酸浸提，三氯甲烷萃取来制取、纯化石杉碱甲。用柱色谱、制备HPLC分离精制石杉碱甲。

【操作过程及工艺条件】

（1）浸渍：将原料千层塔超微粉碎后在罐中用有机酸动态循环浸泡38～60小时，放液3～6次，得渗漉液。(www.xing528.com)

（2）浓缩：将渗漉液放入真空浓缩罐，50～65℃下，真空减压浓缩至原体积的1%～10%。

（3）萃取：将浓缩液用氢氧化钠或氢氧化钾调pH值至8～9.5，三氯甲烷萃取4～6次，合并三氯甲烷萃取液，减压浓缩，真空度600～750mm Hg，三氯甲烷蒸气用—0.3～10℃冷盐水冷却，将冷却的三氯甲烷液流入贮罐，回收至浸膏。

（4）柱色谱：将浸膏烘干处理后拌入硅胶，湿法装柱，避免出现气泡，用配制的三氯甲烷-甲醇洗脱液进行梯度洗脱，用薄层色谱法检查各流分，收集含量高的部分。

（5）结晶：高组分洗脱液冷静置10～20天，温度—0.3～—15℃，沉淀析出后，吸出上清液，抽滤，减压干燥得粗品。

（6）分离精制：结晶粗品用制备型高效液相色谱仪进行分离提纯，采用150mm硅胶柱，用洗脱剂洗脱，收集石杉碱甲段；将石杉碱甲液用旋转式薄膜蒸发器浓缩至原体积的20%～50%，将浓缩液送至真空冷冻机中冷冻干燥，得石杉碱甲成品。

【生产工艺流程】

【工艺注释】

（1）原料采用超微粉料，可提高渗漉的效率；用三氯甲烷分离石松碱甲，可去掉大量极性杂质；硅胶柱色谱柱后可进行结晶处理。

（2）利用制备型高效液相色谱仪进行分离提纯，提高了收率和纯度，生产可达到产业化规模。