43.如何进行纸片法药敏试验？
纸片法药敏试验，操作简单，结果迅速，应用也最普遍。其操作方法步骤如下。
（1）抗菌素纸片的制备（也可购买商品药敏试纸片）
①取质量较好的滤纸用打孔机打成直径6毫米的圆片，每100片放入一小瓶中，160℃干热灭菌1～2小时，或用高压灭菌［1千克力/厘米2（15磅），20分钟］后在36℃条件下烘干。
②配制抗菌药物的浓度。青霉素200国际单位/毫升、磺胺类药物10毫克/毫升、中草药制剂1克/毫升、其他抗菌素1000微克/毫升。
③用无菌操作法将欲测的抗菌药物溶液1毫升，加入100片纸片中，置冰箱内浸泡1～2小时，如立即试验可不烘干。若保存备用，可用下列方法之一烘干（干燥的抗菌素纸片可保存6个月）。
a.培养皿烘干法。将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于37℃温箱内保持2～3小时即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥。
b.真空抽干法。将放有抗菌药物纸片的试管，放在干燥器内，用真空抽气机抽干，一般需要18～24小时。
④将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱保存备用。临用时，用标准敏感菌株做敏感性试验，记录抑菌圈的直径，若抑菌圈比原来的小，则表明该抗菌药物已失效，不能再用。
（2）培养基 一般细菌如肠道杆菌及葡萄球菌等可用普通琼脂平板；链球菌、巴氏杆菌或肺炎球菌等可用血液琼脂平板；测定对磺胺类药物的敏感试验时，应使用蛋白胨琼脂平板。
（3）菌液 为培养10～18小时的幼龄菌液（抑菌圈的大小受菌液浓度的影响较大，因而菌液培养的时间一般不宜超过17小时）。
（4）试验方法 在无菌室或超净工作台内，用接种环无菌操作沾取培养10～18小时的幼龄菌（量要稍多些），以划线的方式将细菌致密而均匀地涂布于普通琼脂平板上，涂得要密一些。若实验菌是肉汤培养液，可先用灭菌吸管或灭菌注射器吸取0.1～0.2毫升，加入琼脂平板表面，用灭菌L形玻璃棒涂布均匀。然后用无菌的尖头镊子夹取各种抗生素药物纸片，按一定密度（每个平板放置4～5片，不要太密，以免相邻的抑菌圈太大而联合，影响结果的判定）平均分布于琼脂表面。并做好标记，以防混淆。将贴有药敏纸片的琼脂平板翻转，底部向上，置于37℃温箱内培养18小时，取出观察结果。(www.xing528.com)
（5）结果判定 经过培养，在具有抗菌能力的药敏感试纸片周围便出现一个无菌生长的透明圈，称为抑菌圈。抑菌圈的大小，说明了该药物的效果高低。若无抑菌圈，则说明该菌对此种药物有耐药性。所以判定结果时，应按测量的抑菌圈直径的大小（以毫米为单位，包括纸片）参照敏感度高低的判定标准（表2-1至表2-3），判定其抗药程度。因此，必须测量抑菌圈的直径，按其大小，报告该菌株对某种药物是敏感或是耐药。
表2-1 青霉素抑菌圈的敏感标准
表2-2 其他抗菌素及磺胺类药物的敏感标准
表2-3 中药抑菌圈的敏感标准
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