34.细菌培养常用的培养基有哪些?其制备方法与步骤如何?
细菌培养基据形态分为固体培养基、半固体培养基、液体培养基;按用途分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、厌氧培养基。固体培养基用于细菌的分离、纯化、生物活性检测等,常用的有普通琼脂平板、营养琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板;半固体培养基常作穿刺试验,用于观察细菌的动力、短期保存菌种等;液体培养基用于扩增纯培养的菌体、确定细菌生长曲线等。
常用培养基制备的方法与步骤如下。
配料—溶化—测定、调节pH—过滤—分装—高压—无菌检验—4℃冰箱保存、备用。
(1)肉汤培养基(液体培养基) 1000毫升。取蛋白胨10克、牛肉膏5克、氯化钠5克,加入去离子水中,加热溶化后,矫正至pH7.6~7.8,用滤纸过滤后分装于无菌试管内,每管5~6毫升,即试管的1/3处,15磅[2]15分钟高压灭菌。该培养基作一般细菌培养用。
(2)普通琼脂培养基(固体培养基) 取营养琼脂41克,加入1000毫升去离子水中混合,隔石棉网微火煮沸,完全溶解后分装入适当容器中,高压灭菌10磅15分钟。该培养基多用于细菌分离培养。(www.xing528.com)
(3)血液琼脂培养基 取营养琼脂4.1克,加入100毫升去离子水中。高压10磅15分钟,冷却至60℃时,无菌操作加入5~10毫升脱纤血(无菌采集马、牛、羊、兔血液),制成血液琼脂平板或试管斜面。常用于病菌的分离或检验病原菌的溶血反应。
(4)半固体培养基 取普通肉汤(pH7.6~7.8)100毫升,琼脂0.5克。将琼脂加于肉汤中,加热融化,过滤分装试管,每支分装约占试管的1/3量,1千克/厘米2(15磅)20分钟高压灭菌,取出直立放置或倾斜放置,待凝固后备用。该培养基用来保存一般菌种或做穿刺试验,用于观察细菌的动力。
(5)鉴别培养基 S.S琼脂粉5.7克,加入100毫升蒸馏水中混合,放置10分钟,隔石棉网微火煮沸使完全溶解,1千克力/厘米2(15磅)20分钟高压消毒,冷却至50℃左右倾入无菌平皿中,凝固后放入4℃冰箱备用。该培养基常作肠道阴性杆菌初步鉴别和致病菌分离培养用。
(6)麦康凯培养基 取麦康凯琼脂粉4.9克,加入100毫升去离子水中混合,放置20分钟,隔石棉网微火煮沸使完全溶解,1千克力/厘米2(高压15磅)20分钟高压灭菌。冷至50℃左右倾入无菌平皿内,凝固后4℃冰箱冷藏备用。该培养基常用于沙门菌分离培养及区别大肠杆菌(形成红色菌落)。
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