制作天麻蜜环菌和萌发菌母种的方法

天麻蜜环菌、萌发菌母种的制作方法

人工栽培天麻，在有性繁殖过程中，需要萌发菌和蜜环菌两种共生菌。在生产实践中，摸索出两种共生菌都能生长的培养基及生产技术。

培养基配制

⒈液体培养基。马铃薯（挖芽眼、去皮、切片）100g，硬杂木屑、麦麸、玉米面各50g，自来水或天然水1300ml，在双重锅内煮沸30分钟用双层纱布过滤。取滤液补水至1000ml，加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨0.5%、10mLVB₁。全部溶解摇匀后，分装于500ml三角瓶或罐头瓶内，每瓶装150ml左右，也可装试管内，装入量为试管容积1/4。三角瓶和试管用棉花塞口，罐头瓶用两层牛皮纸或四层报纸上盖一层塑料布封口，用皮筋扎口。特点：技术含量高，繁殖快，长好即可应用，但不能长期保存。

⒉固体斜面培养基。斜面培养基是食用菌生产中常用的培养基，也按照上述操作程序制取滤液，在滤液中加入琼脂18g，加热溶化并补水至1000ml，趁热加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨5g、10mgVB₁，全部溶解摇匀，分装于试管内，装量为试管容量的1/4，然后用棉花塞口。

⒊木屑培养基。硬杂木屑50%、玉米芯（粉碎成小颗粒状）25%、麦麸15%、玉米面10%，外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%、石灰0.5%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、2%VB₁。将原料和石膏、石灰等干料拌匀，再将上述可溶解的所有辅料溶于水中并拌入原料中，使之含水量为70%，充分拌匀后装入试管，并适当压实。装入量为试管容积的1/2，然后用棉花塞口。特点：耐贮藏，便于邮寄。

灭菌。用手提式高压灭菌锅，也可用民用高压锅代替。

⒈液体和斜面固体培养基。灭菌时，蒸气压力为1.4kg/cm²时稳定保持30分钟，待锅内温度降到50℃～70℃时出锅。液体培养基出锅后直接放入接种箱中，待温度降到25℃以下时接种；斜面固体培养基需趁液体状态时倾斜成斜面（斜面长度约占试管长的3/5），待培养基自然凝固后移入接种箱。

⒉木屑培养基。灭菌时，蒸气压力在1.4kg/cm²时稳定保持45～60分钟，自然降温后，出锅直接放入接种箱。

注意：灭菌锅应事先加足水，开锅后一定待内部冷空气排尽后再压阀，达到压力，调小热源，维持压力。灭好菌后，降压不能过急，以防冲掉棉塞。(www.xing528.com)

接种。必须在无菌条件下，严格按照无菌操作要求进行。

⒈接种液体培养基。只需从母种试管内挑取花生米大小的1～2块母种（带有菌丝的种块）接入三角瓶中。接入试管液体培养基时，种块可小一些。

⒉接种斜面培养基。蜜环菌需趁斜面有凝结水时接种，凝结水有利于蜜环菌萌发。每支试管斜面上接入1～3块母种；接种萌发菌时，需待培养基表面无凝结水时再接种。每支试管斜面上接入1～2块母种。

⒊木屑培养基。培养基灭菌后不能存放，需尽快接种。接种时，用接菌钩适度推压种块，使其与培养基紧密接触，以利菌种萌发生长，接种后立放。

培养。接种后尽快放入恒温箱或培养室，在22℃～24℃条件下恒温培养。

⒈液体种。在培养过程中，从第二天开始启动摇床振荡培养；手工操作时，每天需手工摇动6～8次。如果是试管装，摇动后需斜放，7天左右即可终止培养（萌发菌比蜜环菌的培养时间要多2～3天），应尽快用于生产。成熟的培养液应是清澈透明、淡茶色或土黄色。如果浑浊、液面膜状或呈大量泡沫状即是杂菌污染，应废掉。

⒉斜面种。培养时需平放，48小时左右可看出菌丝萌动并逐渐向周围辐射延伸。当10～15天菌丝贯穿斜面培养基（萌发菌培养时间需长一些）时即可用于生产。置于0℃～4℃冰箱内，蜜环菌保存40天，萌发菌保存60天。

⒊木屑种。接种后需竖立放置培养，防止种块振动，经15～20天培养，蜜环菌菌索或萌发菌菌丝贯穿到瓶底时，即可用于生产。置于0℃～4℃的冰箱内保存，6个月质量不变。经冰箱内久存的木屑菌种用于生产时，为防止接种时感染杂菌，可从试管底部破管取种接种。