ACC含量快速测定方法

实验4－2　ACC含量的测定

一、基本原理

ACC可被NaClO的碱性溶液氧化产生乙烯。乙烯在常温下是气体物质，可直接用气相色谱法测定，然后根据ACC向乙烯转化的效率，就可计算出猕猴桃组织中ACC的含量。

二、仪器及试剂

（一）仪器及用具

研钵、高速冷冻离心机、移液器、水浴锅、旋涡混合仪、旋转蒸发仪、样品瓶（20 ml，带有密封橡胶塞）、离心管、刻度试管（25 ml）、气相色谱仪。

（二）试剂

1．95%乙醇

2．85%乙醇溶液

3．25 mmol/L HgCl₂溶液

称取67．88 mg HgCl₂，用蒸馏水溶解，稀释至10 ml。

4．5% NaClO—饱和NaOH混合液（V _NaClO∶V _NaOH＝2∶1）

5．1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）。

三、实验步骤

（—）ACC的提取与制备

取3 g果肉，加95%乙醇10 ml，匀浆后于4000 r/min离心10 min取上清液，残渣加95%乙醇5 ml提取、离心，合并两次上清液。上清液经55℃浓缩后，加入0．5 ml氯仿和5 ml蒸馏水溶解残留物，离心，上清液即为ACC制备液。于－20℃保存备用。

（二）ACC含量的测定

取0．5 ml ACC制备液于青霉素瓶中，冰浴下加入25 mmol/L HgCl₂溶液40μl，0．5 ml浓度为5%的NaClO—饱和NaOH溶液，用进样器取1 ml气体上气相色谱测定乙烯量。(www.xing528.com)

（三）ACC转化率的计算

取同一处理猕猴桃样品ACC提取液两份，其中一份加入20μl 0．1 mmol/L ACC标准品作为内标物，按照前面叙述的方法进行测定。两份样品乙烯生成量之差即为所添加的ACC转化为乙烯的量。此外，根据所添加ACC的量，计算出理论上能够形成的乙烯的量，就可以计算出该处理的ACC转化率（R），重复三次。计算公式：

R＝（乙烯实际生产量）/（乙烯理论生产量）×100%

四、实验结果与计算

1．测定数据记录（格式如表13）

表13　测定数据记录表

2．计算结果

根据气相色谱法测得顶空气体中乙烯含量，计算每克猕猴桃样品（鲜重）中ACC的含量，以nmol/g m F表示。计算公式：

ACC含量＝（c×V L×V）/（R×V _s×m×22．4）（nmol/g）

式中：c——气相色谱法测得顶空气体中乙烯含量（μl/L）；

　　　V L——样品瓶剩余空间体积（ml）；

　　　V——样品提取液总体积（ml）；

　　　R——ACC向乙烯转变的效率（%）；

　　　V _s——测定时所取样品提取液体积（ml）；

　　　m——样品质量（g）；

　　　22．4——标准状况下1 mol气体体积常数（L/mol）。