猕猴桃叶绿素含量测定方法及结果

实验3－3　猕猴桃叶绿素含量的测定

一、基本原理

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αC L式中：α为比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1 cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

二、材料、仪器及试剂

（一）材料

猕猴桃果实圆片（用打孔器打取果肉，再用不锈钢刀切成1 mm厚的薄片）。

（二）仪器及用具

分光光度计、容量瓶（100 ml）、棕色容量瓶（50 ml）、移液器、研钵、电子天平、漏斗、定量滤纸、量筒（100 ml）。

（三）试剂

1．石英砂；

2．碳酸钙粉；

3．80%（体积分数）丙酮溶液

量取80 ml丙酮（分析纯），加蒸馏水至100 ml，混匀。(www.xing528.com)

三、实验步骤

（一）提取

（1）称取1．0 g样品放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3 ml 80%丙酮溶液，研成匀浆，再加10 ml 80%丙酮溶液继续研磨至组织变白。静置3～5 min提取。

（2）取一张滤纸，折叠后置于漏斗中，用80%丙酮润湿，沿玻璃棒将提取液倒入漏斗中，过滤到50 ml棕色容量瓶中，冲洗研钵、研棒和残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中，用丙酮溶液冲洗，直至滤纸和残渣中无绿色为止。

（3）最后用80%丙酮溶液定容至50 ml，摇匀。注意，各器皿、用具在使用之前必须用80%丙酮溶液润洗。

（二）测定

以80%丙酮溶液为空白参比调零，用1 cm光径比色皿在波长663 nm和645 nm处分别比色测定提取液的吸光度值。重复三次。

四、实验结果与计算

叶绿素a的含量＝12．7×OD₆₆₃－2．69×OD₆₄₅

叶绿素a的含量＝22．9×OD₆₄₅－4．86×OD₆₆₃

叶绿素a、b的总含量＝8．02×OD₆₆₃＋20．20×OD₆₄₅