酶标仪的使用指南
我国免疫诊断方法主要有如下三种：酶免（EIA）、放免（RIA）和发光，在市场上的情况如下：方法所处市场周期、放免衰退期、酶免成长期、发光进入期。放免技术由于试剂的污染和有效期等问题在国际和国内市场逐渐被淘汰，而化学发光试剂和设备比较昂贵，使得其在国内的普及需要较长时间，EIA技术稳定，试剂价格合理，供应充足，酶免技术在中国市场处于成长期。
一、酶标仪的工作原理与主要结构
酶标仪即酶联免疫检测仪，是酶联免疫吸附试验的专用仪器，可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计，即用比色法来分析抗原或抗体的含量。ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250μl以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。
图4-3所示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图。光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本。该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号。电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果。微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程。而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X，Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单。
图4-3 酶标仪
微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液。其常见结构规格有40孔板，55孔板，96孔板等多种，不同的仪器选用不同规格的孔板，对其可进行一孔一孔地检测或一排一排地检测。酶标仪所用的单色光既可通过相干滤光片来获得，也可用分光光度计相同的单色器来得到。在使用滤光片作滤波装置时与普通比色计一样，滤光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，其效果是相同的。目前常用的酶标仪光路系统中，光源灯发出的光经聚光镜、光栅后到达反射镜，经反射镜做90°反射后垂直通过比色溶液，然后再经滤光片送到光电管。酶标仪和普通的光电比色计有以下几点差异:①盛装待测比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板。微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，对抗原抗体有较强的吸附作用，故用它作为固相载体。②由于盛样本的塑料微孔板是多排多孔的，光线只能垂直穿过，因此酶标仪的光来都是垂直通过待测溶液和微孔板的，光束既可是从上到下，也可以是从下到上穿过比色液。③酶标仪通常不仅用A，有时也使用光密度OD来表示吸光度。酶标仪可分为单通道和多通道2种类型，单通道又有自动和手动2种之分。自动型的仪器有X，Y方向的机械驱动机构，可将微孔板L的小孔一个个依次送入光束下面测试，手动型则靠手工移动微孔板来进行测量。在单通道酶标仪的基础上又发展了多通道酶标仪，此类酶标仪一般都是自动化型的。它没有多个光束和多个光电检测器，如12个通道的仪器设有12条光束或12个光源，12个检测器和12个放大器，在X方向的机械驱动装置的作用下，样品12个为一排被检测。多通道酶标仪的检测速度快，但其结构较复杂价格也较高。
二、酶标仪的应用范围
血液学检验：血小板相关抗体的检验（PAIgA、PAIgG、PAIgM）；D-二聚体的测定（D-Dimer）；血清纤维蛋白降解产物的测定（FDP）；三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸测定（T3、T4）。
免疫学检验：C反应蛋白的测定（CRP）；免疫球蛋白的测定（IgD、IgE）；循环免疫复合物的测定（CIC）；类风湿因子的测定（IgG、IgA、IgM类RF）；抗甲状腺球蛋白抗体、微粒体抗体的测定（TG、TM）。
肿瘤免疫学检测：甲胎蛋白的测定（AFP）；癌胚抗原的测定（CEA）；前列腺特异抗原的测定（PSA）；胰癌、胆道癌、胃癌的测定（CA19-9）；卵巢癌的测定（CA125）；乳腺癌的测定（CA15-3）；宫颈鳞癌的测定（SCC）；多发性骨髓癌的测定；甲状腺癌的测定（hTG）。
传染病免疫学检验：甲肝血清学的检测（抗HAV-IgM）；乙肝血清学的检测（两对半）；丙肝血清学的检测（抗HAV-IgG、抗HCV-IgM）；丁肝血清学的检测（抗HDV-IgG、抗HDV-IgM）；戊肝血清学的检测（抗HEV-IgG）；肾综合征出血热类抗体的检测（HFRS-IgG）；乙型脑炎病毒抗体的检测（IgM）；人类免疫缺陷病毒抗体（即艾滋病）的检测（HIV－β2%M）。
优生优育功能检测：弓形虫（体）病毒的检测（TOXO）；风疹病毒的检测（RV）；巨细胞病毒的检测（CMV）；单纯疱病毒的检测［抗HSV（Ⅰ、Ⅱ）］。
其他：本仪器还可做基因检验及兽残、农残检验项目等。
三、酶标仪的简单操作流程
第一步：接上电源，打开机器后面开关，机器开启后，自检后，根据机器上的提示，输入00000后按输入键即可进入机器地操作界面。（如果和打印机连用，则最好先开启打印机，后开酶标仪）
第二步：如果试验地程序已编好，则可直接调出在储存检索菜单里的程序，直接读板。如果试验的程序需要重新编辑，则按编辑菜单里面的程序设置，进行新的试验程序的编辑。
第三步：编辑新程序：按编辑菜单，首先进入程序设置，里面需要进行编辑的有以下几个分菜单：阈值设置，报告种类设置，标准品设置，试验模式设置，酶标板布局设置。定性试验一般要求对阈值进行设置，定量一般则不做要求；定性试验一般不需要对标准品进行设置，而定量则需要对标准品进行设置。
第四步：阈值设置：阈值设置里有以下几个小分项：不使用，常数，质控，公式，比值等。公式阈值：将光标移到公式阈值处，机器里面存有五个公式可供选择，根据试剂盒上的说明选择相应的公式，然后连续按输入键进入公式里面修改里面的K值参数和灰区值（K值参数和灰区值的修改，根据试剂盒说明所给的数据），修改完后按输入键。质控：此设置只需在单阈值内输入灰区值按输入即可。以上两项是试验最常见到需修改的地方。如定量试验则直接选择不使用，跳过此项设置。
第五步：报告种类设置。选择此选项，里面有以下几个分项：原始数据，吸光度，限值，矩阵值，阈值，曲线，浓度，差异。定性试验一般选择原始数据报告，吸光度报告，阈值报告；而定量试验一般选择，原始数据报告，吸光度报告，浓度报告，曲线报告。选择方法：将光标移到所要选择的报告上，按下选择键即选定了所要选择的报告种类，再按下选择键，则解除刚才所选择的报告种类。曲线报告只能在内置打印机或和电脑联合使用时，方可打印此报告。
第六步：标准品设置。此项设置适用于定量试验，定性试验可不做此项设置。
标准品设置：①标准品信息的设置，里面包括标准品的数量、浓度、单位。②标准曲线设置包括曲线种类的设置和坐标轴的设置。标准品数量：可设置0～12个标准品数量，在浓度选项里填入已给定浓度的大小；在单位选项里备有几十个单位可供选择，根据已知浓度的单位选择与之相一致的单位。曲线设置：机器里备有多种曲线可供选择用于标准品的拟和；坐标轴的设置：在这选项里可对坐标轴的X轴，Y轴，进行线性或非线性的设置。
第七步：试验模式的设定。(www.xing528.com)
试验模式设定：在光学测定模式中，机器默认是单波长，将光标移到单波长处，摁右箭头，即选择键即可选择双波长，再摁一下，则又变成单波长。将光标移到波长处，摁右箭头即选择键可在机器里设置好的波长参数里来回选择。振动的设置：机器默认为开，将光标移到开位置，摁右箭头即变成关闭；再摁即又恢复开启状态。时间处：利用数字键键入所需时间。振动强度：用右箭头来回选择中，强，弱。读数：读数设定里有两个分项，分别是读数速度和读数方式。将光标移到读数速度这个选项，里面有快速读数和逐步读数两分项，用右键在两个选项中来回选择。快速读数单波长6秒，双波长15秒；逐步读数：单波长15秒，双波长30秒；将光标移到读数方式的选项，里面有普通读数和评估读数两种，用右键在两个选项中来回选择，以上参数选择完成以后按输入键，使修改的东西得以保存。在读数速度里的快速读数适用于试验量较大的试验；而读数方式里的普通读数，读一次数就出试验结果，评估读数则是读四次取平均值，这样使读出的数据更加准确。
第八步：酶标板布局的设定。按输入键进入此菜单，选择手工排板，按输入键。机器默认的酶标板布局是第一竖排是空白孔，以B表示，第二竖排是标准品以S表示；后面均为加入的样品以X表示。排版方法：你想对某个孔进行设置，例如将第一竖排第二个空白孔设置成标准品9号孔，如果屏幕的左上角字母是“F”。则只需把光标移到该孔，然后按下标有STD的键，那么屏幕上显示该孔现在为标准品1号孔，在摁下表盘上的转换键，此时屏幕上的字母变为“N”，输入O9则变成了标准品9号孔。所有孔的设置均可按此方法进行设置。在屏幕的左上角字母是“F”的情况下，可对某一孔进行性质进行设置，如空白（BLK键）；标准品（STD键);质控（QC键)，样品（SMP键）阳性对照（CP键)，阴性对照（CN键)等；在屏幕的左上角字母是“N”的情况下可对该孔的数字编号进行修改，范围为0－96字母“F”和“N”可通过转换键来回切换。如果多次试验均用一种排板布局，则可以把该模板保存下来，用时即可调出直接使用，排版设置标准品的数量必须和前面标准品信息里的标准品个数相符合否则无法保存。保存方法：酶标板布局设置完成后，按输入键即可。
第九步：试验名称的设置。机器里面有默认的名字，如果你想对其进行修改，便于自己的记忆，可利用光标上键（A-Z)，下键(Z-A)来选择你便于记忆的字母，转换键可改变其大小写。摁输入键，将修改后的名称得以保存。以上试验就基本设置完毕了，按标盘上的开始键即读板了，读完后自动打印，无需摁打印键。
权限设定，更改密码：输入新密码，按输入键即可。更改使用者：输入新的使用者以及密码，输入键即可。程序锁定或解除：移动光标选择程序，用右箭头锁定或解除。滤光片设置：机器一共有八个槽子，可配八个滤光片，机器标准配置为四个滤光片为405、450、490、630，如果用户有需要可加装滤光片。直接插入槽中，轻轻转动转轮，没有阻挡的感觉即可，然后在此操作界面，在你插入滤光片的位置输入波长值，按输入键回到前一界面。时间设置：在此界面可设置年、月、日以及具体的小时、分钟、秒等。
二、使用注意事项
1.工作环境
酶标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。
（1）根据DINVDE0871条例，仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置。
（2）依据DIN45635-19条例，仪器应放置在低于40分贝的环境下。为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。操作时环境温度应在15℃～40℃之间，环境湿度在15%～85%之间。操作电压应保持稳定。操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘。保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。
2.操作注意事项
酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果，因此要得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯，会造成较大误差。
在酶标仪的操作中应注意以下事项：
（1）使用加液器加液，加液头不能混用。
（2）洗板要洗干净。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染。
（3）严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。
（4）在测量过程中，请勿碰酶标板，以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。
（5）请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成后请洗手。
（6）如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害。
（7）如果仪器接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒。
（8）不要在测量过程中关闭电源。
（9）对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。
（10）使用后盖好防尘罩。
（11）出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
