一、免疫血清的制备
由于抗原的性质不同,免疫的具体方法和程序也不同,下边就免疫中几个基本原则加以叙述。
1.抗原
(1)细菌抗原保证为光滑型。如用加有血清或血液的培养基时,则必须将血液成分去除干净。
(2)病毒抗原培养应选无血清培养液,所用培养细胞最好与免疫动物同种。为了避免产生抗正常组织抗体,可用同种动物的组织制备抗原。例如抗猪瘟血清的制备,可用人工感染猪的血清或脾脏作为抗原来免疫猪。
(3)球蛋白抗原在使用前必须纯化,并用不完全或完全弗氏佐剂乳化。
(4)弗氏佐剂:
羊毛脂 40g
石蜡油 60ml
卡介苗(B∶C∶G) 10~20mg/ml
将羊毛脂与石蜡油干烤灭菌,用前研磨混合,在抗原乳化时加入卡介苗。如不加入卡介苗,则成为不完全弗氏佐剂。
2.免疫动物的选择
选用健康的成年动物。年龄过小或过老者因免疫功能不够健全常不采用。一般情况下,雄性较雌性的免疫效果好,处于怀孕期和哺乳期动物免疫效果差。
3.免疫途径
最常用者有皮下、静脉、腹腔、脚掌、腘淋巴结等,有时也选用角膜、肌肉等注射途径。
4.注射程序
因抗原不同而不同。下面以实验室常用的几种免疫血清注射程序为例加以说明:
(1)抗猪瘟血清的制备过程
第一次兔化弱毒(1∶100脾淋毒) 2ml(www.xing528.com)
第二次兔化弱毒(1∶100脾淋毒) 10ml(间隔10天*)
第三次猪瘟强毒(血毒) 100ml(间隔10天*)
第四次猪瘟强毒(血毒) 200ml(间隔10天*)
第五次猪瘟强毒(血毒) 350ml(间隔10天*)
第六次猪瘟强毒(血毒) 500ml(间隔10天*)
最末一次,注射后15天,采血,分离血清。
*间隔时间,指上一次注射时间。
(2)兔抗猪球蛋白血清制备程序
每隔10天注射一次,按下面剂量进行:
第一次5mg 第二次5mg 第三次10mg
第四次10mg 第五次10mg 第六次20mg
末次注射后10天试血,合格者采血,分离血清。
(3)羊抗兔球蛋白血清制备程序
每隔10天注射一次,按下面剂量进行:
第一次50mg (兔球蛋白) 第二次50mg (兔球蛋白)
第三次100mg (兔球蛋白) 第四次100mg (兔球蛋白)
第五次150mg (兔球蛋白) 第六次150mg (兔球蛋白)
末次注射后20天试血,合格者采血,分离血清。
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