荧光抗体技术在疫病诊断中的应用

六、荧光抗体技术的血清学原理

概括地讲，荧光抗体技术也是一种血清学反应，它的基本原理同于一般血清学反应，即抗原和抗体在电解质的参与下特异性的结合成抗原抗体复合物，最后结果的判定也是根据抗原抗体复合物的存在而加以确定。但是，荧光抗体技术所用抗体由于事先用荧光素进行了标记，因此该反应与一般血清学反应有着不同：

（1）反应系统中所形成的抗原抗体复合物在反应的第一阶段，用一定波长的光线照射即发出特异荧光，可以直接进行观察；

（2）由于抗体和组织内抗原直接在玻片上进行反应，致使反应不能进入第二阶段，因此，对于抗原抗体复合物的观察，必须要求在显微镜下进行。

根据抗原和抗体在反应中的不同安排，荧光抗体技术的基本方法有三种：直接法、间接法、补体法，三种方法的原理如下：

1．直接法

先将荧光素标记在抗体球蛋白上，然后再以荧光抗体与标本上的抗原反应，直接检查相应的抗原（如图示1）。

2．间接法(www.xing528.com)

将荧光素标记在抗免疫球蛋白抗体上，制成抗免疫球蛋白荧光抗体，以免疫球蛋白（也叫第一抗体）与相应抗原反应，形成抗原抗体复合物后，再用荧光抗体与抗原抗体复合物中的抗体端发生反应，间接检查相应的抗原（如图示2）。

图示1　直接法

图示2　间接法

3．补体法

抗原和抗体及补体形成复合物后，再以荧光素标记的抗补体进行反应，形成抗原抗补体复合物，间接检查相应抗原（如图示3）。

图示3　补体法

比较上述三种方法，直接法的优点是方法简单，非特异性染色影响因素少，缺点是敏感性比间接法低，而且一种标记抗体只能检查一种抗原；间接法不但能检查抗原，还能测定未知血清的抗体滴度，由于间接法敏感性高，标记一种动物的抗抗血清，即可检查许多种不同疾病的抗原，所以该方法的应用比较普遍，它的缺点是，对照条件多，染色时容易出现其它因素的干扰；补体法在哺乳动物间有补体结合反应的试验中可以通用，虽然该法非常敏感，但因参加反应的因素多，更易出现非特异性反应，目前有关应用方面的报道还不多。