荧光抗体技术在畜禽疫病诊断中的应用

第一章　荧光抗体技术概述

荧光抗体技术也叫免疫荧光技术，它是在组织化学及蛋白质技术发展的基础上建立起来的一项技术。由于荧光素所发出的荧光，可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。这一技术的建立和发展，使生物科学者和医学工作者多年来梦想在显微镜下直接观察组织和细胞中的病毒、细菌、原虫、组织抗原、激素、酶等的愿望变为现实。

早在20世纪40年代前，就有人试图用偶氮染料做指示物，对抗体进行标记，用标记后的抗体与抗原反应，以达到直接观察抗原的目的，但由于敏感性太低，未能达到应用的程度。1942年前，美国病理学家Cocns氏等人以化学组织方法，用异氰酸荧光素（FIC）进行抗体标记，并以标记有这种荧光素的抗体去检查组织内的抗原，在紫外光显微镜下进行观察，结果看到了抗原在组织内的分布，首先提出了荧光抗体检查组织内抗原的方法。但由于当时该方法所用的荧光素在合成和质量上存在问题，因此未能得到广泛应用。后来，Riggs（1958年）及其同事合成了异硫氰酸荧光素（FITC），这种新的荧光素具有性质稳定、容易与蛋白质结合的优点，在抗体标记中克服了过去色素与抗体球蛋白结合不稳定或“毒性”过大引起蛋白质变性和活性降低等缺点。另外，凝胶过滤和柱层析技术在抗体提纯中的应用（1960年，Goldstein等），使荧光抗体的制备程续得以简化，并且排除了非特异性荧光的干扰，使荧光抗体技术有了很大的发展。

目前，荧光抗体技术已成为医学、兽医学研究和临床快速诊断中不可缺少的重要手段，基于荧光抗体技术的研究和应用成果，无论在理论研究方面，还是在实际检验中，该方法具有以下公认的特点：

1．可靠

荧光抗体技术是利用相应抗原抗体的特异性反应而设计的，它将荧光素标记的抗体作为一种试剂，在特定的条件下浸染抗原标本，在抗原抗体的特异性结合下，标本经紫外光或蓝紫光照射后，抗原存在部位就会发出特异荧光，这样检验出的抗原必然是抗体的相应抗原。该方法是将抗原固定在玻片上，通过荧光显微镜观察染色对象的形态学特征（如各种微生物及其组织细胞等），因而也就提高了结果判定的可靠性。

2．快速

免疫荧光法是建立在血清学反应的第一阶段——抗原抗体结合上，所以试验时间较一般血清学方法大大缩短，按常规操作1～2小时即可完成。这对传染病的快速诊断具有非常重要的意义。(www.xing528.com)

3．灵敏

免疫荧光法可看作是一种特殊的染色技术，只要是在显微镜下可辨认的对象，无论数量多少，原则上都可以被查出。例如：肺炎球菌荚膜多糖体的浓度在0．8×40－4微克／毫米2时，可被荧光抗体查出，抗原浓度在1．4×10－4微克／毫米2时，也可被荧光抗体查出。总之，该方法的灵敏度很高，非一般血清学方法所能及。

4．广适性

免疫荧光法原则上可用于一切抗原抗体系统中，如在微生物中，既可应用于细菌、病毒、立克次氏体、钩端螺旋体，也可用于真菌及原虫等。另外，它还可以用于动植物间的血清学反应中的抗原抗体系统。它不仅可用于体外，也可以用于体内，既能查抗原，也可以查抗体。因此说，该方法具有较好的广适性。

5．可进行抗原定位

免疫荧光法对抗原可以进行组织定位、细胞定位、甚至亚细胞水平的定位，这是一般血清学方法及同位素示踪法所办不到的。这一优点对于免疫学、免疫生物学及免疫病理学的研究都是非常重要的。