右旋糖酐水解和分级沉淀的生物制药应用技术

一、任务介绍

在模拟仿真生产环境下完成右旋糖酐的水解和分级沉淀。要求：

1.熟练进行右旋糖酐的水解，学会进行水解终点的判断。

2.知道分级沉淀获得药用右旋糖酐的原理，能将水解液进行分级沉淀。

3.能够熟练利用乙醇计准确测定液体的乙醇浓度。

二、任务分析

由于发酵法生产过程控制较难，所得产物的分子量大，要经过水解之后用不同浓度的乙醇进行多次分级沉淀，才能得到临床用中、低、小分子量的右旋糖酐成品。水解时间过长或过短，均只能得到分子量过小或过大的右旋糖酐，影响产品产率和质量。

三、相关知识

右旋糖酐分子量与溶解度的关系。

四、任务需要的材料

1.原料　右旋糖酐粗品。

2.仪器设备　粉碎机，超级恒温水浴锅，乙醇计，抽滤装置，干燥机。

3.试剂　盐酸，氢氧化钠，乙醇，纯化水。

五、任务实施

（一）操作前准备

1.水解划分操作人员按《洁净区人员更衣规程》进行更衣。

2.检查操作间、配料间是否有清场合格标志，并在有效期内。否则按清场标准操作规程进行清场并经QA人员检查合格后，填写清场合格证，才能进行下一步操作。将“清场合格证”附入批生产记录。

3.检查设备是否有“合格”、“已清洁”标牌，并对设备进行检查，确认设备正常，挂运行状态标志，方可使用；检查主要仪器、仪表是否经过校验，并在有效期内。否则应更换合格仪器、仪表。

4.根据“批生产指令”填写领料单，到物料部门领取物料。

5.挂运行状态标志，进入操作。

（二）生产操作

1.加热糊化　将干燥后的右旋糖酐产品进行粉碎，取一定量右旋糖酐，准确计算并加入蒸馏水至终浓度约为11%，然后于94～95℃放置糊化，保温至液面无黏块浮起，糊化操作即告结束。

2.水解　量取用蒸馏水稀释至6mol/L的浓盐酸边搅拌边加入到糊化后的液体中并保持水解液温度96℃以上，保持水解液浓度为11%左右。

3.终止水解　取样按照《右旋糖酐粘度测定标准操作规程》测相对黏度，当水解液的相对黏度在2.60～3.00之间时（0.5～1小时），加入6mol/L的氢氧化钠溶液中和水解液，终止水解反应。加入氢氧化钠要缓慢，以防止局部过碱避免水解液发黄。然后测液体的pH，若pH低于6.0，则仍需要加入氢氧化钠，调节水解液的pH。

4.划分工序　按照表8-1中分级沉淀进行操作，可以得到右旋糖酐70（重均分子量64　000 ～76　000）、右旋糖酐40（重均分子量32　000～42　000）、右旋糖酐20（重均分子量16　000～24　000）。(www.xing528.com)

表8-1　乙醇浓度与沉淀物分子量关系

操作方法：在搅拌下，将高浓度乙醇溶液缓缓加入到冷却的水解液中，用乙醇计测其乙醇度，加到所需浓度时，不断搅拌使其均匀。然后四级划分，分别在40℃、34℃、40℃、室温下静置不同时间，倾倒出上清液，沉淀物干燥。准备称重并转入清洁灭菌容器，室温保存。

（三）生产结束

1.按《水解划分车间清场操作规程》对仪器、房间进行清洁消毒。

2.填写批生产记录，并签字。

3.填写清场记录，经QA检查员检查合格，并签发“清场合格证”。

（四）标准操作规程

1.水解划分生产岗位标准操作规程。

2.乙醇计标准操作规程。

3.干燥箱标准操作规程。

4.酸度计标准操作规程。

5.黏度计标准操作规程。

6.水解划分间清场操作规程。

六、归纳总结

（一）生产工艺管理要点

1.车间保持GMP要求的洁净度级别。

2.根据生产工艺，按照粗品的量计算各试剂用量。

（二）质量控制关键点

1.水解终点的控制影响到药用右旋糖酐的收率。

2.乙醇浓度的准确测定影响到产品质量、收率和分子量分布。

七、拓展提高

该工序大量使用乙醇，使用过程中要注意通风和防爆。

（王雅洁）