种子制备：如何获得活力高的种子，提升产品质量

一、任务介绍

在模拟仿真生产环境下完成右旋糖酐发酵种子的制备。要求：

1.知道发酵工业菌种的复壮工艺流程和质量控制要点。

2.完成右旋糖酐菌种的制备，获得斜面种子和液体种子。

3.按照超净工作台操作规程，进行相关操作。

二、任务分析

右旋糖酐的生产菌是肠膜状明串珠菌，采用甘油管法可保藏1～2年。菌种在保存过程中处于休眠状态，当保藏菌种重新利用时就需要进行菌种复苏，并通过种子扩大培养获得活力好的种子。

三、相关知识点

目前国际国内常用的菌种保存方法包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。针对不同的菌种保藏方法（菌种保存方法），菌种复苏方法有所不同。

种子的质量是影响产品的关键因素，所以得到活力高的种子对发酵过程非常重要。

四、任务需要的材料

1.菌种　肠膜状明串珠菌。

2.仪器和设备　摇床、培养箱、超净工作台。

五、任务实施

（一）操作前准备

1.制种操作人员按《洁净区人员更衣规程》进行更衣。

2.检查操作间是否有清场合格标志，并在有效期内。否则按清场标准操作规程进行清场并经QA人员检查合格后，填写清场合格证，才能进行下一步操作。将“清场合格证”附入批生产记录。

3.清洁超净工作台外表面后打开超净工作台的紫外线和风机，灭菌30分钟，挂运行状态标志。

4.检查生化培养箱和摇床是否有“合格”、“已清洁”标牌，并对设备进行检查，确认设备正常，挂运行状态标志，方可使用。

5.根据“批生产指令”填写领料单，到菌种部门领取菌种。

（二）生产操作

1.菌种的活化　按照《超净工作台标准操作规程》将甘油管保藏的菌种拿至超净工作台，用75%乙醇进行表面消毒后打开，用接种环蘸取少量进行平板画线。平板于25.5℃培养22小时，观察生长情况和菌落形态并记录，附入批生产记录。(www.xing528.com)

2.斜面种子的制备　挑选平板上生长情况良好的菌种接到斜面种子培养基上，25.5℃培养22小时。观察生长情况和菌落形态并记录，附入批生产记录。

3.液体种子的制备　将斜面种子接种到液体培养基中，120转/分、25.5℃培养22小时。观察生长情况和种子形态并记录，附入批生产记录。选择生长情况良好、活力好的种子移交到发酵车间准备进行右旋糖酐发酵。

（三）生产结束

1.接种结束后，关闭设备所有开关，关闭总电源。

2.填写《生产菌种制备与移交记录——固体菌种》、《生产菌种制备与移交记录——液体菌种》。

3.按《菌种间清场操作规程》对设备、房间进行清洁消毒。

4.填写清场记录，经QA检查员检查合格，在批生产记录上签字，并签发“清场合格证”。

（四）标准操作规程

1.菌种岗位标准操作规程。

2.超净工作台标准操作规程。

3.菌种间清场操作规程。

六、归纳总结

（一）生产工艺管理要点

1.菌种操作室洁保持GMP要求的洁净度级别。

2.接种过程应确保严格的无菌操作。

3.根据菌种的生长状况和形态进行选择，挑选活力好的种子。

（二）质量控制关键点

严格按照无菌操作，防止菌种被污染和环境的二次污染。

七、拓展提高

超净工作台的维护　应定期对超净台进行动态（即有人操作时）下浮游菌测试，即将培养皿打开后放置在操作台面上半小时，封盖后进行培养计数。若不符合要求应清洁或更换过滤器。

（王雅洁）