一、任务介绍
在模拟仿真生产环境下完成发酵产物检测工作。要求：学会纸层析方法鉴定发酵产物是谷氨酸。
二、任务分析
纸层析法是用层析滤纸作支持剂，以纸上所吸附的水作固定相，用与水不相混溶或相混溶的溶剂作展开剂，是流动相。将欲分离的样品液点在纸条上晾干。当流动相沿纸条移动时，带动着试样中的各组分以不同的速率向前移动，在一定时间内，不同组分被带到纸上的不同部位，出现层析现象，以达到分离的目的。溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：
Rf＝原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
三、相关知识点
谷氨酸的定性测定：用纸层析法。展开剂为正丁醇∶冰醋酸∶水＝4∶1∶1；显色剂为0.1%～0.5%茚三酮的丙酮溶液。
四、任务材料
1.扩展剂 将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放入分液漏斗中，与5体积水混合，充分振荡，静置后分层，弃去下层水层。
2.氨基酸溶液 0.5%的已知氨基酸溶液三种（赖氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸），0.5%的待测氨基酸液一种。
3.显色剂 0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。
五、任务实施(www.xing528.com)
1.平衡 剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析缸或大烧杯倒置于塑料薄膜上，再把盛有约20ml展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中，用塑料薄膜密封起来，平衡20分钟。
2.规划 带上手套，取宽约14cm、高约22cm的层析滤纸一张。在纸的下端距边缘2cm处轻轻用铅笔画一条平行于底边的直线A，在直线上做4个记号，记号之间间隔2cm，这就是原点的位置。另在距左边缘1cm处画一条平行于左边缘的直线B，在B线上以A、B两线的交点为原点标明刻度（以厘米为单位）（图4-1）。
3.点样 用微量注射器分别取10ml左右的氨基酸样品（每取一个样之前都要用蒸馏水洗涤微量注射器，以免交叉污染），点在这四个位置上。挤一滴点一次，同一位置上需点2～3次，每次2～3μl，每点完一点，立刻用电吹风热风吹干后再点，以保证每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm。每人需点4个样，其中3个是已知样，1个是待测样品。
4.层析 用针、线将滤纸缝成筒状，纸的两侧边缘不能接触且要保持平行（图4-2）。向培养皿中加入扩展剂，使其液面高度达到1cm左右，将点好样的滤纸筒直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面在A线下约1cm），罩上大烧杯，仍用塑料薄膜密封。当扩展剂上升到A线时开始计时，每隔一定时间测定一下扩展剂上升的高度。当上升到15～18cm，取出滤纸，剪断连线，立即用铅笔描出溶剂前沿线，迅速用电吹风热风吹干。
5.显色 用喷雾器在通风厨中向滤纸上均匀喷上显色剂，待丙酮挥发后，置于105℃烘箱加热5～10分钟，氨基酸显现紫色斑点（图4-3），分别测定发酵液与标准谷氨酸斑点Rf值。
图4-1 规划
图4-2 层析
图4-3 显色
六、归纳总结
操作要点和注意事项。
（陈的华）
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