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生物制药实训:测定谷氨酸含量

时间:2024-01-26 百科知识 版权反馈
【摘要】:氨基酸定量测定用茚三酮比色法。标准溶液:用天平准确称取1.0000g谷氨酸标准品→溶于缓冲溶液中定容至1L→摇匀→吸1ml于另外100ml容量瓶,用缓冲溶液定容100ml,即得1000ug/ml标液。

生物制药实训:测定谷氨酸含量

一、任务介绍

在模拟仿真生产环境下完成发酵产物检测工作。要求:学会谷氨酸的定量测定方法。

二、任务分析

谷氨酸和茚三酮在弱酸条件下共热反应可以生成蓝紫色物质,其颜色的深浅主要与谷氨酸的浓度有关,产生的颜色深浅与游离α-氨基氮含量成正比,在波长570nm下有最大吸收值,可用比色法测定。

三、相关知识点

谷氨酸的定量测定:通过测定发酵液中的游离氨基酸的氨基氮来得到,或用SBA-40测定仪。氨基酸定量测定用茚三酮比色法。

四、任务材料

1.仪器 可见光分光光度计,具塞试管,直径16mm,长150mm,沸腾水浴,20℃水浴。

2.试剂

缓冲溶液的制备:配制pH6.0NaAc-HAc缓冲溶液。取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水稀释至500ml,即得。

谷氨酸标准液的配制:用天平准确称取1.000 0g谷氨酸标准品,溶于1L缓冲溶液中。

标准溶液:用天平准确称取1.000 0g谷氨酸标准品→溶于缓冲溶液中定容至1L→摇匀→吸1ml于另外100ml容量瓶,用缓冲溶液定容100ml,即得1000ug/ml标液。在0℃贮藏。再采用逐级稀释法,配得浓度为80μg/ml、90μg/ml至140μg/ml的谷氨酸标准液。(www.xing528.com)

茚三酮试剂的制备:称取0.5g茚三酮溶于100ml水中得到5g/L的茚三酮水溶液。

五、任务实施

1.制备标准曲线 对谷氨酸标准液进行稀释,制备80~140μg/ml的谷氨酸稀释液。分别吸取80~140μg/ml的谷氨酸标准液4ml于25ml的比色管中,各加入1ml的茚三酮试剂(表4-1),加上塞充分摇匀。将其置于90℃下水浴20~25分钟,20℃水浴冷却至室温,用752型分光光度计在570nm下测得其光密度值。以标准液的光密度值和浓度做一标准曲线。

表4-1 谷氨酸标准曲线的制备

2.样品的测定 稀释待测液于80~140μg/ml内(谷氨酸发酵液浓度一般在8%~14%,测量时稀释1000倍即可),调pH为6.0(NaAc-HAc缓冲溶液调pH)(表4-2)。以同样的反应量与反应条件进行反应,并在570nm下测定其光密度值。

表4-2 发酵液中谷氨酸含量的测定

3.根据标准曲线,计算样品中氨基酸的含量 由以上所得标准曲线对应查得待测稀释液的浓度,再乘以稀释倍数,即为谷氨酸待测液的浓度。

六、任务总结

操作要点和注意事项。

七、任务拓展

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