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生物素缺陷型菌株在谷氨酸发酵中的应用技术需求

时间:2024-01-26 百科知识 版权反馈
【摘要】:使用生物素缺陷型菌株进行谷氨酸发酵时,必须限制发酵培养基中生物素的浓度。生物素只有控制在亚适量时,才能既有利于谷氨酸的合成,又有利于谷氨酸向细胞外渗透。目前,企业多采用添加玉米浆、糖蜜或纯生物素等形式控制生物素的亚适量。

生物素缺陷型菌株在谷氨酸发酵中的应用技术需求

一、谷氨酸的代谢通路、关键酶、调控机制

(一)代谢途径

谷氨酸的代谢途径见图2-1。

图2-1 谷氨酸的代谢途径

谷氨酸产生菌中谷氨酸的生物合成途径如图所示:其中的代谢途径包括糖酵解途径(EMP)、磷酸己糖途径(HMP)、三羧酸循环(TCA循环)、乙醛酸循环、伍德-沃克曼反应(CO2固定反应)等。葡萄糖经过EMP(主要)和HMP途径生成丙酮酸,其中一部分氧化脱羧生成乙酰CoA进入TCA循环,另一部分固定CO2生成草酰乙酸或苹果酸,草酰乙酸与乙酰CoA在柠檬酸合成酶催化下,所合成柠檬酸,再经过氧化还原共扼的氨基化反应生成谷氨酸。

(二)关键酶

α-酮戊二酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶。

(三)调控机制

1.谷氨酸比天冬氨酸优先合成,谷氨酸合成过量后,谷氨酸的生物合成受其自身的反馈抑制和反阻遏,代谢转向合成天冬氨酸。

2.磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶是催化CO2固定的关键酶,受谷氨酸的反馈抑制。

3.柠檬酸合成酶是三羧酸循环的关键酶,除受能荷调节外,还受谷氨酸的反馈阻遏。

4.谷氨酸脱氢酶受谷氨酸的反馈抑制和阻遏。

5.生物素的影响 在谷氨酸生产过程中,生物素的主要作用是作为乙酰辅酶A的辅酶影响磷脂的合成,进而影响谷氨酸产生菌细胞膜的通透性,同时也影响菌体的代谢途径。使用生物素缺陷型菌株进行谷氨酸发酵时,必须限制发酵培养基中生物素的浓度。若生物素缺乏,菌株生长不好,初级代谢减慢或受阻,间接引起乙醛酸循环中四碳二羧酸氧化能力下降,使α-酮戊二酸和NADPH减少,从而使谷氨酸合成下降;若生物素过量,菌体生长快,解糖速度加快,比丙酮酸进一步氧化要快,造成乳酸积累。生物素只有控制在亚适量时,才能既有利于谷氨酸的合成,又有利于谷氨酸向细胞外渗透。目前,企业多采用添加玉米浆、糖蜜或纯生物素等形式控制生物素的亚适量。谷氨酸发酵生产中生物素浓度的控制要根据菌种的特性、发酵工艺条件、发酵培养基的种类、发酵原料的来源、发酵过程中的糖浓度、pH和生物素浓度及供氧条件、设备状况等综合考虑。(www.xing528.com)

二、谷氨酸发酵的优化问题

谷氨酸发酵是典型的代谢控制发酵,环境条件对谷氨酸发酵具有重要的影响,控制最适宜的环境条件是提高发酵产率的重要条件。

1.碳源 目前使用的谷氨酸生产菌均不能利用淀粉,只能利用葡萄糖、果糖等,有些菌种还能利用醋酸、正烷烃等做碳源。在一定的范围内,谷氨酸产量随葡萄糖浓度的增加而增加,但若葡萄糖浓度过高,由于渗透压过大,则对菌体的生长很不利,谷氨酸对糖的转化率降低。国内谷氨酸发酵糖浓度为125~150g/L,但一般采用流加糖工艺。

2.氮源 常见无机氮源:尿素液氨碳酸氢铵。常见有机碳源:玉米浆,豆浓,糖蜜。当氮源的浓度过低时会使菌体细胞营养过度贫乏形成“生理饥饿”,影响菌体增殖和代谢,导致产酸率低。随着玉米浆的浓度增高,菌体大量增殖使谷氨酸非积累型细胞增多,同时又因生物素过量使代谢合成磷脂增多,导致细胞膜增厚,不利于谷氨酸的分泌,造成谷氨酸产量下降。碳氮比一般控制在100∶(15~30)。

3.磷 当磷浓度过高时,很容易发生发酵转换,转向合成缬氨酸;但磷浓度过低,则菌体生长不好,不利于高产酸。

4.生物素 随着生物素添加量的不断增加,发酵产酸先增大、后减小。

5.溶氧 谷氨酸发酵是典型好氧发酵,溶解氧对谷氨酸产生菌种子培养影响很大。溶解氧过低,菌体呼吸受到抑制,从而抑制生长,引起乳酸等副产物的积累;但是并非溶氧越高越好,当溶氧满足菌的需氧量后继续升高,不但会造成浪费,还会由于高氧水平而抑制菌体生长和谷氨酸的生成。

6.pH 在谷氨酸发酵过程中,随着谷氨酸的不断生成,发酵液的pH不断的减小,对谷氨酸菌产生抑制,为了维持发酵的最佳条件,采用流加尿素和液氨(现在大多采用的是液氨)的方法。发酵法在微生物发酵阶段,主要是获得谷氨酸,在氨过量存在的情况下以谷氨酸铵的形式存在,所以从发酵罐出来的是谷氨酸铵,而不是我们所希望的谷氨酸。

7.温度 在整个流加发酵中,并非一定要控制恒温培养,因为菌体最适生长温度不一定是菌体积累代谢终产物的最佳温度。谷氨酸菌体最适生长温度为30~32℃;谷氨酸最适合成温度为34~37℃;发酵初期温度提高可以缩短细胞生长时间,减少发酵总时间;发酵中、后期的菌体活力较强,适当提高发酵温度有利于细胞膜渗透性和产酸,故温度应控制稍高一些。

8.接种时间 利用对数生长期中后期的种子接种,可缩短其延滞期,而且菌体生长迅速,菌体浓度相对较高,有利于缩短发酵周期,提高代谢产物的产量。

9.接种量 接种量大小直接影响发酵产酸。接种量太小,发酵前期生长缓慢,发酵整个时间长,菌种的活力下降,发酵效果差;接种量过大,会引起菌体增长过快,单位体积内的养料和溶氧供应不足,代谢废物较多,不利于产酸。接种量适宜,能减少染菌机会,缩短发酵周期,因此,接种量一般要求以适量为原则。

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