菌株B-FS01的细胞革兰氏染色阳性,菌体杆状,大小为(0.7~0.8)μm×(3.5~4.0)μm,培养72h后产生芽孢,芽孢中生,椭圆形,孢囊稍膨大,抗酸染色阴性,无伴孢晶体,能运动,鞭毛周生。在营养琼脂平板上,菌落淡黄色,蜡质,圆形,边缘整齐,菌落隆起呈馒头形,表面湿润;在营养琼脂斜面上划线培养,呈直线形;在液体培养基中静止培养,表面形成白色菌膜。由此看出B-FS01与芽孢杆菌的形态特征吻合。
B-FS01的生理生化特性分析结果见表2-1。从表2-1可以看出:B-FS01菌株为好氧菌,但也可厌氧生长,在pH值为5.7的培养基中或7%NaCl培养基中均可生长,接触酶反应阳性,V.P.反应阳性,V.P.培养液生长7d后pH值为6.5,可利用葡萄糖、乳糖、木糖、甘露醇产酸;具水解淀粉、明胶、酪朊的能力,可利用柠檬酸盐,不能利用丙酸盐,具还原硝酸盐的能力,卵磷脂酶阳性,不产吲哚,产生H2S,生长温度为10℃~45℃,最适宜的生长温度为25℃~35℃。
表2-1 B-FS01的生理生化特性
注:表中“+”表示阳性。“-”表示阴性。“A”表示产酸。
菌株B-FS01分解有机磷农药的测定结果见图2-1。从图2-1可以看出:在含有25μg/mL的三唑磷的查彼克去磷培养基上,菌株B-FS01仍可生长,说明菌株B-FS01能够将有机磷分解释放出磷素营养。这与其对卵磷脂酶反应呈阳性的试验结果相吻合。(www.xing528.com)
图2-1 B-FS01利用三唑磷(25μg/mL)作为磷源的生长情况
A—三唑磷为唯一磷源;B—磷酸二氢钾为磷源
菌株B-FS01生物固氮活性测定结果见图2-2。从图2-2可以看出:菌株B-FS01在无氮源平板上也能生长,只是比对照生长稍弱。这说明它具有自生生物固氮活性,因此能利用空气中的分子态氮。本试验的设计是基于多粘芽孢杆菌的许多菌株能固氮,而本试验中菌株B-FS01能利用硝酸盐,同时利用去除硝酸盐的无氮源查彼克培养基测定B-FS01菌株能否固氮。结果如图2-2所示,因此菌株B-FS01具有生物固氮活性。
图2-2 菌株B-FS01的生物固氮作用
A—无氮培养基生长情况;B—正常对照
根据以上形态及培养特征和生理生化性状的描述,参照文献[61]-[64],该菌能厌氧生长,所以可以排除是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的可能;又因为该菌的最高生长温度为45℃,不能利用丙酸盐,所以可以排除地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)。B-FS01菌株的细胞小于蜡状芽孢杆菌(B.cereus)和苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis),具有生物固氮活性。除卵磷脂酶及耐盐性测定不符外,其余特征均与多粘芽孢杆菌相同,所以可以将菌株B-FS01鉴定为多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)的近似种。确切定种有待于进一步进行16SrDNA序列等指标的测定。
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